硫酸鹽還原菌亞硫酸鹽還原酶的初步研究.pdf

1、亞硫酸鹽還原酶在亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化為硫化物的過(guò)程中，是起關(guān)鍵催化作用的酶。因此，對(duì)其發(fā)酵工藝條件、分離純化和酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行研究，可為亞硫酸鹽還原酶工業(yè)化提供基本依據(jù)。 發(fā)酵工藝條件主要包括碳源、氮源、溫度、起始pH、裝液量及發(fā)酵周期等。通過(guò)搖瓶單因素實(shí)驗(yàn)，綜合考慮酶活力、菌體生長(zhǎng)、經(jīng)濟(jì)因素、確定以可溶性淀粉作為碳源，以尿素作為氮源，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行碳氮比實(shí)驗(yàn)。碳氮比實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：當(dāng)碳氮比為1：3時(shí)，OD和酶活均最高。得出的產(chǎn)亞硫酸鹽

2、還原酶發(fā)酵培養(yǎng)基為：KCl 0.3g ；MgSO<,4>-7H<,2>O 3.0g；MgCl<,2>-6H<,2>O 2．5g；NH<,4>Cl 0.5g:NaCl 1.0g；KH<,2>PO<,4> 0.6g;可溶性淀粉2.0g；尿素6.0g；抗壞血酸0.5g；L-Cys半胱氨酸0.5g；FeSO<,4>(NH<,4>)2SO<,4>-6H<,2>O 2.0g(其中Vc、半胱氨酸、FeS04-(NH<,4>)2SO<,4>-6H<,

3、2>O在培養(yǎng)前加入)。 通過(guò)對(duì)SRB發(fā)酵產(chǎn)酶的培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化，其結(jié)果為：以5％的接種量接種到150mL的錐形瓶中，裝液量為．50mL，，初始pH值為7，培養(yǎng)溫度為35℃，搖床培養(yǎng)42h；經(jīng)優(yōu)化培養(yǎng)后，酶活達(dá)到16.2U／mL。 通過(guò)鹽析、透析、Sephadex G-100凝膠過(guò)濾、DEAE-52纖維素柱層析一系列純化步驟，亞硫酸鹽還原酶相對(duì)于粗酶液純化了115.30倍，酶比活力由0.6U／mg提高到69.18U／mg，

4、酶回收率為18.36％，電泳分析為單一條帶，達(dá)到了電泳純。 以亞硫酸鈉為底物，對(duì)亞硫酸鹽還原酶的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，酶反應(yīng)的最適溫度和最適pH分別為30℃和7.7；熱穩(wěn)定性較好，80℃時(shí)酶活性仍能維持在55％左右；pH4～10之間均較穩(wěn)定，殘余酶活都在60％以上；Fe<'3+>、cu<'2+>、Mn<'2+>、Co<'2+>對(duì)亞硫酸鹽還原酶有明顯的抑制作用，ca<'2+>、Zn<'2+>、Ag<'+>．Fe<'2+>對(duì)