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1、目的:運(yùn)用膜片鉗技術(shù)原理和全細(xì)胞記錄方式研究壽爾智膠囊對(duì)健康大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞及AD模型大鼠腦神經(jīng)遞質(zhì)所表達(dá)的離子通道的影響,從而探討中藥防治老年性癡呆的機(jī)理。 方法:(1)運(yùn)用血清藥理學(xué)方法,制備家兔含藥血清。分為壽爾智含藥血清組、哈伯因含藥血清組和生理鹽水血清組(簡(jiǎn)稱空白組)。壽爾智含藥血清組以川芎嗪(壽爾智組藥物之一,川芎的有效成分)為代表成分進(jìn)行定性檢測(cè)。 (2)運(yùn)用神經(jīng)元細(xì)胞分散及培養(yǎng)技術(shù),分散和培養(yǎng)海馬神經(jīng)元
2、細(xì)胞運(yùn)用于膜片鉗技術(shù)和全細(xì)胞記錄方式記錄離子通道電流。 (3)運(yùn)用離子通道的原理及膜片鉗全細(xì)胞記錄方式分別記錄各組(加含藥血清前后)海馬神經(jīng)元細(xì)胞鈉離子、鉀離子及L—型鈣離子通道電流,并觀察其I—V曲線的變化。 (4)運(yùn)用D—半乳糖眼球后注射方法復(fù)制AD模型大鼠,并運(yùn)用分子克隆技術(shù),神經(jīng)遞質(zhì)基因表達(dá)系統(tǒng)及膜片鉗技術(shù)記錄AD模型大鼠腦mRNA在爪蟾卵母細(xì)胞上所表達(dá)的神經(jīng)遞質(zhì)通道電流和跨膜電壓,觀察壽爾智含藥血清對(duì)其跨膜電壓
3、和通道電流的影響。 結(jié)果:(1)壽爾智含藥血清中藥代表成分川芎嗪定性檢測(cè)結(jié)果表明兔血清中含有壽爾智方藥中的藥物成分。 (2)分離后培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元細(xì)胞生長(zhǎng)良好,培養(yǎng)12-15天的海馬神經(jīng)元細(xì)胞貼壁完全,細(xì)胞體積較大,有利于高阻封接,在細(xì)胞記錄中能觀察到明顯的突觸自發(fā)活動(dòng)。 (3)壽爾智含藥血清能有效增強(qiáng)鈉離子通道電流峰值,加速鈉離子通道失活;明顯增強(qiáng)鉀電流峰值,增加鉀通道電導(dǎo);有效抑制L—型鈣離子電流峰值,與對(duì)照
4、組比較有顯著性差異(p<0.05)。 (4)壽爾智含藥血清能增強(qiáng)AD模型大鼠腦mRNA在爪蟾卵母細(xì)胞上所表達(dá)的神經(jīng)遞質(zhì)通道電流和跨膜電壓,與對(duì)照組比較有顯著性差異(p<0.05)。 結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)研究表明壽爾智對(duì)于體外培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞鈉離子、鉀離子、L—型鈣離子通道電流及其相關(guān)I—V曲線具有明顯的影響。中藥復(fù)方壽爾智能明顯提高鈉離子、鉀離子電流INa IK的峰值,同時(shí)可使鈉離子通道迅速失活,而增加鉀離子通道電導(dǎo),使
5、海馬神經(jīng)元除極化時(shí)間縮短、迅速產(chǎn)生較強(qiáng)幅度的動(dòng)作電位,抑制海馬神經(jīng)元細(xì)胞持續(xù)去極化,使其復(fù)極化時(shí)間縮短。壽爾智能有效抑制鈣電流幅度,即具有明顯的阻滯鈣離子內(nèi)流的作用,降低細(xì)胞內(nèi)鈣含量,防止因鈣超載引起的細(xì)胞凋亡。 研究壽爾智對(duì)AD模型大鼠腦神經(jīng)遞質(zhì)所表達(dá)的離子通道電流的影響,其結(jié)果表明壽爾智能有效促進(jìn)興奮性神經(jīng)遞質(zhì)釋放。因此壽爾智通過(guò)上述作用機(jī)理產(chǎn)生了對(duì)海馬神經(jīng)元既興奮神經(jīng)細(xì)胞又節(jié)制其興奮性神經(jīng)遞質(zhì)過(guò)度釋放的作用。其中主要以加速
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