土壤中四類典型抗生素的同時(shí)測定及其方法優(yōu)化.pdf

1、抗生素不但被廣泛用于人和動(dòng)物的防病治病，還被添加于動(dòng)物飼料中作為飼料添加劑以提高飼料利用率和促進(jìn)動(dòng)物生長。近年來，隨著禽畜養(yǎng)殖業(yè)規(guī)模的不斷擴(kuò)大，抗生素使用量大增，抗生素濫用的問題越來越突出。進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)的抗生素不能被完全吸收，部分會(huì)隨著動(dòng)物的排泄物排出體外。而大量糞便通常未經(jīng)處理便作為有機(jī)肥施于農(nóng)田，抗生素隨著糞便不斷進(jìn)入到土壤，對生態(tài)環(huán)境和人體健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅。
　　 抗生素作為新型環(huán)境污染物已引起國內(nèi)外的高度關(guān)注。建立土壤中

2、抗生素高精度多組分檢測方法成為關(guān)注的熱點(diǎn)。本論文擬建立同時(shí)測定土壤中多種抗生素的高精度檢測方法并對其進(jìn)行優(yōu)化，這一方法對土壤抗生素的污染研究具有重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義。
　　 目的：
　　 1.對方法的主要參數(shù)條件、萃取劑和填充劑進(jìn)行優(yōu)化，建立提取土壤抗生素的加速溶劑萃取法。
　　 2.建立同時(shí)測定土壤中磺胺類、喹諾酮類、四環(huán)素類和大環(huán)內(nèi)酯類15種抗生素的加速溶劑萃取-固相萃取-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(ASE-SP

3、E-HPLC-MS/MS)分析方法，并對方法進(jìn)行優(yōu)化。
　　 3.在相同試驗(yàn)條件下，對加速溶劑萃取方法(ASE)和超聲萃取方法(SAE)進(jìn)行比較，為土壤抗生素提取方法的研究提供參考。
　　 方法：
　　 1.提取:ASE方法中，土樣以乙腈-磷酸鹽緩沖液為萃取劑，EDTA處理的硅藻土為分散劑，在壓力1500 psi，溫度70℃，靜態(tài)萃取10 min，循環(huán)1次的參數(shù)下完成萃取。SAE方法中，土樣以乙腈-磷酸鹽緩沖液為

4、萃取劑，通過振蕩混勻、超聲和離心完成萃取，殘?jiān)磸?fù)提取兩次。
　　 2.凈化富集（濃縮）:萃取液通過SAX-HLB串聯(lián)柱凈化富集，6 ml甲醇洗脫，氮?dú)獯抵两?，?fù)溶于1 ml甲醇-水(v∶v=1∶1)溶液。
　　 3.檢測:目標(biāo)抗生素以0.1％甲酸溶液(A)和乙腈(B)為流動(dòng)相，流速0.4 ml/min，進(jìn)樣量10μl，柱溫20℃，通過梯度洗脫進(jìn)行分離，在HPLC-MS/MS多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）下進(jìn)行檢測。

5、　　 結(jié)果：
　　 1.用ASE-SPE-HPLC-MS/MS方法對加標(biāo)土樣進(jìn)行提取、檢測，磺胺類、喹諾酮類、四環(huán)素類和大環(huán)內(nèi)酯類抗生素回收率范圍分別為72.3％～93.6％，63.2％～90.2％，60.2％～85.4％，67.2％～78.9％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD＜10％。檢測限依次為0.5～0.9μg/kg，1.3～1.6μg/kg，0.2～1.1μg/kg，0.2～0.3μg/kg，相關(guān)系數(shù)r＞0.99，線性關(guān)系良好。<

6、br>　　 2.用SAE法土樣提取加標(biāo)土樣，四類抗生素加標(biāo)回收率范圍在51.6％～80.6％之間，RSD均小于11％。用SAE方法和ASE方法，采用相同萃取劑在各自最優(yōu)條件下提取加標(biāo)200μg/kg的土樣，前者用時(shí)96min，萃取劑18 ml，四類抗生素回收率在50％～80％，后者用時(shí)18 min，萃取劑36 ml，回收率在60％～85％。
　　 結(jié)論：
　　 1.優(yōu)化后的ASE方法能在16 min內(nèi)完成土壤抗生素的萃