K-ras、P53基因突變和Pax2、P53、Ki67蛋白在卵巢漿液性癌中表達的研究.pdf

1、【目的】研究卵巢漿液性癌中k-ras、P53基因突變及Pax2、P53、Ki67蛋白的表達特征,探討卵巢漿液性癌兩級分級系統(tǒng)在臨床病理診斷中的應(yīng)用價值,為提高準(zhǔn)確診斷及合理的臨床治療提供依據(jù)。
　　【方法】依照美國MDAnderson癌癥中心的Malpica[3]等對卵巢漿液性癌提出的兩級分級系統(tǒng)的分級標(biāo)準(zhǔn),分別選取低級別卵巢漿液性癌25例,高級別卵巢漿液性癌38例作為實驗組,另選取卵巢漿液性囊腺瘤20例作為對照組。應(yīng)用聚合酶鏈反

2、應(yīng)(polymerasechainreaction,PCR)擴增和直接測序法檢測K-ras基因第一外顯子的基因突變。應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(polymerasechainreaction-restrictedfragmentlengthpolymorphism,PCR-RFLP)技術(shù)檢測P53基因Arg72密碼子、第三內(nèi)含子和第六內(nèi)含子的突變情況。應(yīng)用免疫組織化學(xué)(immunohistochemisty,IHC)EnVi

3、sion法檢測Pax2、P53、K-i67蛋白的表達水平。用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行兩獨立樣本t檢驗及卡方檢驗,計算和比較各組基因突變及蛋白陽性表達率,分析其與低、高級別漿液性癌及臨床病理特征的相關(guān)性。
　　【結(jié)果】
　　1、卵巢漿液性癌中低級別組中K-ras基因突變率(28.0％)顯著高于高級別組(5.3%)(P<0.05),漿液性囊腺瘤中未檢出突變。
　　2、P53基因第72位密碼子三種基因型(CC、CG、GG

4、)和C、G等位基因在3組分布均無差異(P>0.005)。第三內(nèi)含子含有A’基因型在低級別卵巢漿液性癌組與高級別卵巢漿液性癌組中分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),其中3例第三內(nèi)含子A’A’基因純合突變均發(fā)生在高級別漿液性癌組中,低級別組未檢測到第三內(nèi)含子A’A’基因純合突變。5例第三內(nèi)含子AA’基因雜合突變均發(fā)生在高級別漿液性癌組中,低級別組未檢測到第三內(nèi)含子AA’基因雜合突變。第六內(nèi)含子的三種基因型(NN、NN’、N’N’)和N、N

5、’等位基因頻率在卵巢漿液性癌組和卵巢漿液性囊腺瘤組中的分布有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。3例第六內(nèi)含子N’N’基因純合突變均發(fā)生在高級別漿液性癌組中,低級別組未檢測到第六內(nèi)含子N’N’基因純合突變。
　　3、P53蛋白強陽性率在低、高級別漿液性癌中的表達率分別為28%和63.2%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),在漿液性囊腺瘤中未表達。
　　4、Pax2蛋白在低、高級別分別為48%和18.4%,差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.0

6、5)。在漿液性囊腺瘤中表達率為30%,與卵巢漿液性癌組的差別具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　5、Ki-67蛋白在低、高級別組中的陽性率分別為16%和57.9%(P<0.05),在漿液性囊腺瘤中未表達。
　　6、P53、Pax2、Ki-67蛋白陽性率在低、高級別漿液性癌中均與是否累及雙側(cè)卵巢、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小及年齡無相關(guān)性(P>0.05)。
　　【結(jié)論】
　　1、卵巢低、高級別漿液性癌具有不同的分子遺

7、傳學(xué)、免疫表型。
　　2、在卵巢漿液性癌中,低級別漿液性癌主要發(fā)生K-ras基因第一外顯子中第12位和第13位密碼子點突變;高級別漿液性癌主要發(fā)生P53基因第三內(nèi)含子和第六內(nèi)含子的突變。提示低、高級別卵巢漿液性癌不同的基因突變位點在卵巢漿液性癌的發(fā)生、發(fā)展中起一定作用。
　　3、P53、Pax2、Ki-67蛋白在低、高級別漿液性癌中表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。提示其在卵巢漿液性癌治療時可作為分子生物學(xué)指標(biāo)。