D-β-羥基丁酸對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、短暫性腦缺血引發(fā)缺血性腦卒中(Ischemic Stroke)，在卒中人群中，缺血性腦卒中占大多數(shù)。D-β-羥基丁酸(D-β-hydroxybutyrate, DβHB)是脂肪酸在肝臟內(nèi)分解時(shí)的中間代謝產(chǎn)物，為三大酮體之一，當(dāng)機(jī)體葡萄糖供應(yīng)不足時(shí)，DβHB可作為能源物質(zhì)代替葡萄糖為腦等組織提供能量。有研究表明生酮飲食(ketogenic Diet, KD)或DβHB可減小腦卒中和腦外傷(Traumatic Brain Injury, T

2、BI)中梗死區(qū)域或挫傷體積，但其作用機(jī)制尚不明確。
　　為探索DβHB對(duì)腦缺血的保護(hù)作用機(jī)制，我們應(yīng)用改良Longa栓線法建立SD大鼠大腦中動(dòng)脈阻斷再灌注(MCAO-R)模型模擬暫時(shí)性缺血性腦卒中，同時(shí)建立細(xì)胞糖剝奪/復(fù)氧(OGD-R)模型進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組(Control)，手術(shù)組(MCAO-R)和手術(shù)前后腹腔注射DβHB組(MCAO+DβHB)。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組(Control)，氧糖剝奪/復(fù)氧組(OG

3、D-R)，不同濃度DβHB條件下氧糖剝奪/復(fù)氧組(OGD+DβHB)和不同濃度Glucose條件下氧糖剝奪/復(fù)氧組(OGD+Glucose)。動(dòng)物手術(shù)后24h使用TTC染色評(píng)價(jià)腦梗死體積，檢測(cè)腦組織和OGD2h，不同復(fù)氧時(shí)間細(xì)胞中超氧化物歧化酶(SOD)，還原型谷胱甘肽(GSH)的活性以及ATP水平。雙氫羅丹明123(Dihydrorhodamine123, DHR123)檢測(cè)OGD2h，復(fù)氧1h細(xì)胞中活性氧(ROS)含量。檢測(cè)OGD2

4、h，復(fù)氧1h細(xì)胞線粒體內(nèi)NADH水平。分別用RT-PCR和Western blot的方法檢測(cè)組織和細(xì)胞中UCP2的表達(dá)和complex I、complex II和MDH1蛋白水平的變化。
　　TTC結(jié)果顯示DβHB能有效減小缺血導(dǎo)致的的梗死灶體積。DβHB能減少細(xì)胞在缺糖缺氧條件下ROS的產(chǎn)生，提高缺糖缺氧/缺血條件下細(xì)胞或組織內(nèi)的SOD水平。這一結(jié)果說明DβHB能夠減少胞內(nèi)ROS量的積累。DβHB能夠提高缺糖缺氧/缺血條件下細(xì)胞