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1、目的:骨折局部常常因?yàn)槔w維組織及軟骨缺乏足夠的骨化而形成骨不連,而轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)及結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)的協(xié)同具有明顯促進(jìn)軟骨及骨增殖和分化的特性,從而促進(jìn)骨愈合。本實(shí)驗(yàn)通過觀察骨缺損不愈合和愈合過程中 TGF-β1及 CTGF的局部分布和表達(dá)水平差異,研究骨缺損不愈合的分子機(jī)理,進(jìn)一步探討TGF-β1及CTGF對(duì)骨折愈合的影響。
方法:1、制作骨折愈合及骨缺損不愈合動(dòng)物模型。選成年新西蘭大白兔30只,
2、雌雄不限,隨機(jī)分為6組,每組5只,制造一側(cè)橈骨干骨缺損不愈合模型為實(shí)驗(yàn)組,制造另一側(cè)骨折愈合模型為對(duì)照側(cè)。術(shù)后1、2、4、6、8、12周取材。2、X線及組織學(xué)觀察骨愈合及組織學(xué)成骨情況。3、免疫組化檢測(cè)TGF-β1及CTGF的表達(dá)。4、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)以上兩因子的基因表達(dá)。
結(jié)果:1、X線及組織學(xué)檢查顯示實(shí)驗(yàn)組骨缺損區(qū)未形成骨性連接,主要為纖維結(jié)締組織所充填,骨缺損兩端有少量的膜內(nèi)成骨及軟骨內(nèi)成骨存在,大
3、部分肉芽組織及肥大軟骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化為纖維結(jié)締組織,斷端硬化,髓腔閉塞。對(duì)照組膜內(nèi)成骨及軟骨內(nèi)成骨均活躍,6周時(shí)骨折愈合。2、免疫組化顯示實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組 TGF-β1及CTGF表達(dá)在2周時(shí)均明顯增強(qiáng),但實(shí)驗(yàn)組表達(dá)量明顯低于對(duì)照組(P<0.05),4-6周實(shí)驗(yàn)組TGF-β1及CTGF在各種細(xì)胞中表達(dá)均明顯減少至微弱表達(dá),而對(duì)照組在成骨細(xì)胞和周圍的骨基質(zhì)中仍有較強(qiáng)表達(dá),差異有顯著性(P<0.05),8周后兩組TGF-β1及CTGF表達(dá)均微弱,無(wú)顯
4、著性差異(P>0.05).3、RT-PCR檢測(cè)顯示:實(shí)驗(yàn)組 TGF-β1mRNA在1、2、4、6周的相對(duì)表達(dá)量分別為(0.347±0.013、0.785±0.025、0.378±0.029、0.257±0.030),均明顯低于對(duì)照組的(0.425±0.020、0.950±0.035、0.764±0.022、0.156±0.012),差異有顯著性(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組CTGFmRNA表達(dá)1、2、4、6、周分別為(0.305±0.015、
5、0.283±0.011、0.204±0.013、0.115±0.008),低于對(duì)照組同時(shí)段的1、2、4、6周(0.426±0.010、0.405±0.021、0.252±0.018、0.138±0.017),差異有顯著性(P<0.05)。8周后兩組TGF-β1mRNA及CTGFmRNA表達(dá)無(wú)明顯差異(P>0.05)
結(jié)論:
1、骨缺損由于缺乏足夠的膜內(nèi)成骨及軟骨內(nèi)成骨而形成骨不連,這是骨不連形成的重要原因。
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