IgG亞型及其在系統(tǒng)性紅斑狼瘡和類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的意義研究以及病毒與人類(lèi)基因組的比對(duì).pdf

1、本文從以下幾部分展開(kāi)： 第一部分定量檢測(cè)人血清IgG4雙抗體夾心ELISA方法的建立 目的：正常人血清中IgG4(Immunoglobulin G4)含量很低，但是在某些病理?xiàng)l件下IgG4濃度卻會(huì)大幅度增高，因此檢測(cè)IgG4濃度具有重要的臨床意義。本研究擬建立—靈敏、快捷的定量檢測(cè)人血清IgG4濃度的雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme—linked immunosorbent assay，ELISA)方法。

2、 方法：用鼠抗人IgG4單克隆抗體包被聚苯乙烯微孔板，以識(shí)別并結(jié)合待測(cè)標(biāo)本中的人IgG4，辣根過(guò)氧化酶(horseradish peroxidase，HRP)標(biāo)記的兔抗人IgG檢測(cè)IgG4。用棋盤(pán)滴定法確定雙抗體夾心ELISA最佳反應(yīng)條件。純化的人IgG4作標(biāo)準(zhǔn)品系列稀釋液，在已包被鼠抗人IgG4單克隆抗體的固相板中加入IgG4標(biāo)準(zhǔn)品(或待測(cè)樣本)，反應(yīng)、洗滌后，加入酶標(biāo)兔抗人IgG抗體，反應(yīng)、洗滌后，板上形成鼠抗人IgG4單抗—IgG

3、4—兔抗人IgG—HRP復(fù)合物，加底物顯色，用酶標(biāo)儀在450/620 nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查出標(biāo)本中IgG4含量。并從靈敏度、精密度、相關(guān)性等方法學(xué)上考察所建立的ELISA檢測(cè)體系。 結(jié)果：用棋盤(pán)滴定法確定雙抗體夾心ELISA最佳反應(yīng)條件如下：抗體包被濃度2μg/mL，酶標(biāo)抗體稀釋度1：2000，在此條件下做標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，當(dāng)IgG4的濃度在8μg/L～512μg/L時(shí)，IgG4標(biāo)準(zhǔn)品濃度值的自然對(duì)

4、數(shù)值與OD值之間具有良好的線性關(guān)系，回歸方程y=0.6027x—1.023(R2=0.9971)。對(duì)建立的ELISA系統(tǒng)進(jìn)行方法學(xué)考察，線性檢測(cè)范圍8μg/L～512μg/L，靈敏度為5.95μg/L，批內(nèi)精密度7.32％～10.36％，批間精密度10.01％～14.19％。檢測(cè)統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清IgG4濃度，與市售試劑盒的相關(guān)性良好(r=0.854)。 結(jié)論：成功建立了一種可用于檢測(cè)人血清IgG4濃度的雙抗體夾心ELISA方

5、法。 第二部分系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清IgG亞型的定量檢測(cè) 目的：探討系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎與血清IgG(Immunoglobulin G)亞型水平改變的關(guān)系。 方法：用免疫散射比濁法測(cè)定72例類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清、105例系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清中IgG1、IgG2、IgG3、IgG4的濃度。這些患者根據(jù)疾病活動(dòng)程度分為活動(dòng)期組和非活動(dòng)期組。同時(shí)檢測(cè)45例健康人的血清作為對(duì)照。 結(jié)果：1

6、05例系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清IgG1、IgG2、IgG3、IgG4的濃度用中位數(shù)(第5，95百分位數(shù))表示分別為12200(5281，21800) mg/L，5890(1487，13040) mg/L，865(199.4，1916) mg/L，202(68.100，1320) mg/L；72例類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清IgG1、IgG2、IgG3、IgG4的濃度分別為10150(4769，21085)mg/L，6495(2368，11640)

7、 mg/L，814.5(344.8，1264) mg/L，365.5(72.85，1377.5) mg/L；45例正常對(duì)照血清IgG1、IgG2、IgG3、IgG4的濃度分別為5840(3439，10056) mg/L，3590(1575，6167) mg/L，658(204，916.6) mg/L，248(68.100，672.1) mg/L。系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清IgG1、IgG2和IgG3濃度與對(duì)照組相比顯著增高(P<0.001)

8、，IgG4濃度與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05)；根據(jù)疾病活動(dòng)程度分為疾病活動(dòng)期組和非活動(dòng)期組時(shí)，非活動(dòng)期組IgG3濃度降低(差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05)，其余三個(gè)亞型無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值>0.05)。類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清各IgG亞型濃度明顯高于健康對(duì)照組(差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.001)；活動(dòng)期組與非活動(dòng)期組各IgG亞型濃度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 結(jié)論：在系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病中，IgG1、IgG2、IgG3濃度顯著增

9、高，說(shuō)明這些IgG亞型參與了疾病免疫病理過(guò)程，非活動(dòng)期與活動(dòng)期相比IgG3的濃度降低，說(shuō)明IgG3自身抗體在系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病期起主要的致炎癥作用。在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎疾病中，各IgG亞型濃度與健康對(duì)照組相比明顯增高，說(shuō)明各IgG亞型均參與類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎免疫病理過(guò)程。 第三部分病毒與人類(lèi)基因組序列相似片段 目的：人與病毒接觸通常不會(huì)感染疾病。一部分病毒可以致病，但是，這些疾病所致的大部分病理癥狀并不是由病毒本身引起的，而是由于人

10、的免疫系統(tǒng)清除病毒而造成的副作用。在人和病毒長(zhǎng)期的相互作用下，他們的基因組之間可能存在相似的部分，這可能與病毒感染人類(lèi)有生物學(xué)的聯(lián)系。本研究的目的是探討病毒與人基因組之間是否存在相似序列。 方法：人類(lèi)基因組的發(fā)布，使得我們可以對(duì)病毒和人的基因組進(jìn)行比對(duì)。我們利用美國(guó)國(guó)立生物信心中心(National Center for Biotechnology Information，NCBI)的平臺(tái)，使用基本局部搜索工具(Basic Lo

11、cal Alignment Search Tool，BLAST)對(duì)病毒和人的基因組序列進(jìn)行比對(duì)。對(duì)比的病毒包括多種DNA病毒和RNA病毒。 結(jié)果：我們發(fā)現(xiàn)所有比對(duì)的病毒都含有不同數(shù)目的序列片段與人基因組序列片段完全相同。DNA病毒或者基因組較大的病毒往往比RNA病毒含更多的相同序列；對(duì)同一種病毒，亞型不同，所含的相同片段數(shù)目也不同。這些相同的序列片段長(zhǎng)度都在20-30 nt之間，有些片段在人基因組不同位置多次出現(xiàn)。這些片段在人的

12、基因組中有的正向排列，也有的負(fù)向排列。大部分相同序列片段位于人的基因編碼區(qū)之間，有些位于人的基因編碼區(qū)，少數(shù)位于基因非編碼區(qū)。對(duì)包含相似序列的人類(lèi)基因進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)大部分基因的與新陳代謝有關(guān)。這些基因編碼酶、結(jié)合蛋白、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，參與DNA復(fù)制和細(xì)胞代謝。 結(jié)論：根據(jù)序列比對(duì)結(jié)果，我們提出一個(gè)假說(shuō)：在人類(lèi)與病毒漫長(zhǎng)的相互作用過(guò)程中，病毒將它們的基因片段帶入到人的基因組中。人和病毒都可能利用這些相同序列得以更好的生存。這在這個(gè)過(guò)程中