光氧化反應(yīng)深低溫處理同種異體氣管移植的上皮細(xì)胞和軟骨細(xì)胞研究.pdf

1、研究背景:
　　氣管疾病以及創(chuàng)傷導(dǎo)致的氣管狹窄及缺損，在臨床上較為常見。1881年Gluck等首次成功進(jìn)行的氣管切斷再吻合手術(shù),標(biāo)志著氣管外科的開始。而經(jīng)手術(shù)治療中，氣管切除過長(zhǎng)，超過約成人氣管長(zhǎng)度的二分之一，兒童氣管的三分之一，則需要?dú)夤苤亟ā６硐氲臍夤芴娲牧闲枰邆湟韵聨追N特質(zhì)：1、封密的管腔結(jié)構(gòu)；2、質(zhì)地柔韌；3、良好的生物相容性；4、低炎性反應(yīng)；5、低免疫性；6、有助于氣管上皮細(xì)胞在管內(nèi)壁生長(zhǎng)。隨著研究人員在氣管重建上

2、的研究的深入，氣管重建替代物的選擇越來(lái)越多，也逐漸成熟。由于免疫抑制劑應(yīng)用于器官移植抗排斥反應(yīng)中,為同種異體氣管移植進(jìn)一步創(chuàng)造了條件，但免疫抑制劑的使用會(huì)促使腫瘤的復(fù)發(fā)，這對(duì)于氣管惡性腫瘤患者的異體氣管移植將增加其腫瘤復(fù)發(fā)的幾率。如何控制免疫排斥反應(yīng)，降低移植物自身的抗原？目前國(guó)內(nèi)外研究的降低異體氣管抗原性的主要處理方法包括移植物的放療、低溫保存及脫細(xì)胞等。近幾年有關(guān)研究提出經(jīng)光氧化反應(yīng)處理生物材料后，有無(wú)細(xì)胞毒性、低鈣化性、弱免疫原性

3、和良好生物相容性等優(yōu)勢(shì)。本實(shí)驗(yàn)采用光氧化反應(yīng)處理后深低溫保存兔氣管移植，對(duì)移植后氣管的上皮細(xì)胞和軟骨細(xì)胞進(jìn)行觀察，評(píng)價(jià)此項(xiàng)光氧化反應(yīng)處理技術(shù)的可行性、有效性，為解決同種異體氣管移植的處理方式提供一條新途徑。
　　目的:
　　光氧化反應(yīng)處理深低溫保存兔異體氣管，建立同種異體氣管移植的兔模型，觀察兔氣管上皮細(xì)胞及氣管軟骨細(xì)胞的情況，研究光氧化反應(yīng)處理兔異體氣管的可行性、有效性。
　　方法:
　　36只實(shí)驗(yàn)用兔(雌雄不

4、限,體重2.5-3 kg)，隨機(jī)分為供體組（n=18）和受體組（n=18），受體組隨機(jī)分為深低溫移植對(duì)照組（A組，n=9）和光氧化反應(yīng)深低溫移植組（B組，n=9）。B組為光氧化反應(yīng)處理后,經(jīng)液氮深低溫保存6周異體氣管移植組。A組為未經(jīng)光氧化反應(yīng)處理，經(jīng)液氮深低溫保存6周異體氣管移植組。A組、B組經(jīng)一期手術(shù)將移植氣管包埋在受體兔腹腔大網(wǎng)膜內(nèi)再血管化14天，二期手術(shù)經(jīng)原切口分離大網(wǎng)膜,保留血管蒂，清理移植段氣管二端,原位移植于受體兔頸部。二

5、期手術(shù)術(shù)后8周處死受體兔取移植氣管標(biāo)本，HE染色后顯微鏡下觀察病理改變，計(jì)算標(biāo)本上皮積分和軟骨積分。
　　結(jié)果:
　　經(jīng)光氧化方法處理后的B組材料呈淺藍(lán)色，組織結(jié)構(gòu)完好，質(zhì)地柔韌性等方面與新鮮組織相似。A組、B組經(jīng)液氮深低溫保存后的組織結(jié)構(gòu)完好，與新鮮組織相比無(wú)明顯區(qū)別。
　　實(shí)驗(yàn)兔在一期手術(shù)，術(shù)中術(shù)后死亡率0％，術(shù)后14d實(shí)驗(yàn)兔生存狀態(tài)良好；實(shí)驗(yàn)兔在二期手術(shù)，術(shù)中死亡率0%。A組、B組均有一例大網(wǎng)膜包埋后異體氣管稍有

6、變形，其余異體氣管的組織形態(tài)均完好。
　　二期手術(shù)后8周，取移植氣管標(biāo)本。A組、B組HE染色觀察氣管壁有淋巴細(xì)胞，中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，部分可見動(dòng)脈內(nèi)膜局部增厚，向腔內(nèi)突起，其內(nèi)見泡沫細(xì)胞聚集，少量淋巴浸潤(rùn)，粥樣斑塊形成。B組的上皮積分明顯高于 A組的上皮積分有顯著差異（p<0.05）。B組的軟骨積分均值較A組的軟骨積分均值低，但A組、B組的軟骨積分沒有顯著差異（p>0.05）。
　　結(jié)論:
　　1、應(yīng)用光氧化反應(yīng)深低溫保存