多功能金納米粒介導(dǎo)光熱-化療聯(lián)合模式治療裸鼠晚期前列腺癌的實驗研究.pdf

1、目的：研究近紅外激光照射后載多西他賽多功能金納米粒（MGN@DTX）對人前列腺癌細胞（PC-3）的細胞毒性作用以及對荷瘤裸鼠腫瘤生長的抑制作用，以期建立體外控釋前列腺癌光熱-化療聯(lián)合治療體系。
　　方法：首先合成MGN@DTX（包括PEG化空殼金納米粒HGNs，表面修飾靶向配體葉酸和螯合劑DTPTT）并檢測其屬性：⑴用PBS配置不同濃度的DTX，分光光度計測定其OD值，并繪制標準曲線；⑵測定MGN@DTX、多功能金納米粒（MGNs

2、）、DTX光譜；⑶測定 MGN@DTX的DTX運載量；⑷以808nm近紅外激光照射MGN@DTX（每小時照射一次，每次5min），計算DTX釋放率，并在高分辨電鏡下觀察其形態(tài)變化；⑸將MGN@DTX置于37℃血清中比較0h、1h、24h分光光度計全波長掃描光譜的變化，評定其穩(wěn)定性；⑹以 CCK-8細胞毒性試驗比較不同濃度（1.8nM~116nM）下，MGN@DTX激光處理組（MGN@DTX+Laser）、MGN@DTX組、DTX組和對照

3、組與PC-3細胞共培養(yǎng)24h、48h、72h后對細胞的毒性作用。
　　99mTc標記MGNs和HGNs，并測定放射性化學(xué)純度。在已建立的荷PC-3前列腺癌裸鼠模型進行：⑴體內(nèi)顯像：6只6-8W荷瘤裸鼠隨機分為兩組，每組三只，分別尾靜脈注射0.2 mL(3.7 MBq)99mTc-MGNs和99mTc-HGNs。注射后1h，仰臥位行SPECT全身靜態(tài)顯像；⑵體內(nèi)分布：于腫瘤最佳顯影時間，頸椎脫臼法處死裸鼠，分別取心、肝、脾、肺、腎、

4、胃、小腸、大腸、腫瘤、皮膚、骨骼、肌肉和腦等臟器，稱重并測定放射性計數(shù)，計算％ID/g。
　　荷瘤裸鼠體內(nèi)，MGN@DTX光熱-化療聯(lián)合模式治療測試：20只6-8W荷瘤裸鼠，隨機分為四組，每組5只。于開始治療的第1,5,9,13,17天分別尾靜脈注射200ul DTX（2.5 mg/kg），MGN@DTX（20mg/kg，含2.5 mg/kg DTX），MGNs（20mg/kg）和PBS。MGN@DTX組與MGNs組注射后1h在腫

5、瘤局部進行體外近紅外激光（808nm，4.12W/cm2）照射5min，每天觀察裸鼠生長狀態(tài)，定期測量裸鼠體重及瘤體變化，計算腫瘤抑制率并比較組間差異。
　　結(jié)果：0.5ug/ml~16ug/ml DTX在PBS中溶解性良好，并且在此濃度范圍下標準曲線線性關(guān)系良好； MGN@DTX等離子體共振吸收峰為847nm，MGNs與DTX分別在798nm及231nm；以最佳配置比0.4mg/ml MGNs與0.1mg/ml DTX等體積比溶

6、于PBS，運載量77.98%；MGN@DTX近紅外激光照射后在高分辨透射電鏡下可觀察到納米金球形態(tài)的改變，且第一次照射后就有較高的DTX釋放率（40.57%）；MGN@DTX在人血清中24h光譜未見明顯改變；CCK-8細胞毒性試驗顯示游離的DTX與MGN@DTX+Laser組在不同的濃度和培養(yǎng)時間下均有顯著的細胞毒性作用，而MGN@DTX對 PC-3僅有較小的影響；且與細胞共培養(yǎng)72h后，MGN@DTX+Laser組細胞毒性顯著高于DT

7、X組。
　　快速薄層層析法測99mTc-MGNs放化純?yōu)?7.69%。體內(nèi) SPECT顯像顯示99mTc-MGNs組腫瘤局部可見放射性聚集，而99mTc-HGNs組在腫瘤局部未見明顯放射性分布。體內(nèi)生物分布檢測亦提示99mTc-MGNs具有腫瘤靶向性。
　　體內(nèi)治療實驗顯示與其他三組（DTX組、MGN+Laser組、對照組）相比，MGN@DTX+Laser組治療末腫瘤體積最小，抑瘤率最高（26.97±1.60%），提示該組腫