碘過量通過誘導(dǎo)Th17細(xì)胞分化促進(jìn)橋本氏甲狀腺炎發(fā)病機(jī)制的研究.pdf

1、目的:橋本氏甲狀腺炎是臨床上最常見的引起甲狀腺功能減退的甲狀腺疾病。其發(fā)病機(jī)制目前仍未完全闡明。目前已有許多流行病學(xué)證據(jù)證實(shí):橋本氏甲狀腺炎的發(fā)病與碘攝入量過高相關(guān)。但高水平碘劑是如何造成橋本氏甲狀腺炎的發(fā)病,以及在此過程中相關(guān)的細(xì)胞、分子事件卻鮮有報(bào)道。并且,高水平碘對(duì)于機(jī)體的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的影響亦不十分清楚。本研究通過檢測(cè)與自身免疫性疾病密切相關(guān)的白細(xì)胞介素-17在橋本氏甲狀腺炎患者中的表達(dá),確定橋本氏甲狀腺炎發(fā)病的相關(guān)免疫學(xué)基礎(chǔ),進(jìn)

2、而深入研究碘在橋本氏甲狀腺炎發(fā)病過程中的細(xì)胞和分子機(jī)制以及其對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)的影響。
　　材料和方法:本研究首先利用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)橋本氏甲狀腺炎患者甲狀腺組織與正常甲狀腺組織中浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞進(jìn)行分子表型分析,確定淋巴細(xì)胞亞型;進(jìn)而納入了2009年7月至2011年9月至我院甲狀腺乳腺外科、內(nèi)分泌科就診的患者共169名。其中,初診或確診為HT的患者82名,確診為結(jié)節(jié)性甲狀腺腫的患者53名,確診為甲狀腺癌的患者34名以及60位健康志愿者。以

3、免疫酶聯(lián)吸附法(ELISA)測(cè)定患者和對(duì)照人群血清中白細(xì)胞介素-17(IL-17)、TGF-β1、IL-6、IL-1β的含量,并以HT患者口服左旋-甲狀腺素鈉(優(yōu)甲樂)的劑量作為衡量甲狀腺剩余功能的標(biāo)準(zhǔn),將患者分為三組:處于一過性甲狀腺功能亢進(jìn)期組,甲狀腺功能部分減退期組(口服優(yōu)甲樂劑量在0~25,25~75μg)及甲狀腺功能大部減退期組(口服優(yōu)甲樂劑量在87.5μg及以上),觀察IL-17在病程的不同階段含量是否發(fā)生變化;對(duì)橋本氏甲狀

4、腺炎患者的甲狀腺的局部病理表現(xiàn)與IL-17表達(dá)的相關(guān)性進(jìn)行了分析。
　　為進(jìn)一步了解碘劑在橋本氏甲狀腺炎發(fā)病中的作用,我們以不同水平碘劑(0,1500,6000,12000,24000μg/L)配合小鼠甲狀腺球蛋白皮下免疫的小鼠甲狀腺炎模型對(duì)碘劑的作用進(jìn)行了初步的探討。C57小鼠隨機(jī)分組后,給予不同劑量的碘劑飲水三個(gè)月后,再以小鼠甲狀腺球蛋白Tg進(jìn)行皮下免疫誘發(fā)免疫反應(yīng),利用RT-PCR以及實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)對(duì)小鼠脾臟的IL-17

5、以及IFN-γ含量進(jìn)行檢測(cè),了解輔助性T細(xì)胞的分化情況;利用流式細(xì)胞技術(shù)對(duì)小鼠脾臟調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的分布進(jìn)行了檢測(cè),觀察不同劑量的碘劑對(duì)于免疫系統(tǒng)以及免疫反應(yīng)的影響。
　　結(jié)果:橋本氏甲狀腺炎患者甲狀腺組織中Th17細(xì)胞比例明顯多于正常甲狀腺組織,而橋本氏甲狀腺炎患者血清IL-17、IL-6、IL-1β的含量亦明顯高于正常對(duì)照組;且隨著疾病進(jìn)程的發(fā)展,甲狀腺功能的逐步喪失,血清IL-17的含量逐步下降。IL-17特異性的表達(dá)于HT患者

6、甲狀腺組織中,且呈非勻質(zhì)分布,病理切片顯示:IL-17的表達(dá)與甲狀腺纖維化呈正相關(guān)。
　　不同碘劑濃度喂養(yǎng)下的自身免疫性甲狀腺炎小鼠,其脾臟IL-17的含量較對(duì)照組相比均升高;同時(shí),IL-17與IFN-γ的表達(dá)情況呈反比,即:隨著服用碘劑劑量的增加,IL-17的表達(dá)情況呈下降趨勢(shì),而IFN-γ的表達(dá)隨著碘劑劑量的增大而逐漸上升;同時(shí),隨著碘劑劑量的增加,小鼠CD3+Foxp3+的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞含量逐漸降低。
　　結(jié)論:IL-1

7、7可能在HT發(fā)病的初期參與自身免疫過程的發(fā)病,局部IL-17的表達(dá)與局部纖維化程度相關(guān)。碘劑對(duì)于免疫系統(tǒng)因劑量不同而具有雙重作用:高劑量碘環(huán)境下可以促進(jìn)Th1細(xì)胞反應(yīng);而低劑量碘劑可以促進(jìn)Th17細(xì)胞的分化。甲狀腺局部由于組織特殊性,呈現(xiàn)高碘狀態(tài),促進(jìn)Th1細(xì)胞分化,進(jìn)而造成以Th1細(xì)胞介導(dǎo)的甲狀腺局部組織炎癥破壞,纖維化的病理表現(xiàn)為主的不均質(zhì)組織破壞;而在外周免疫系統(tǒng)中,低劑量碘劑促進(jìn)Th17細(xì)胞的分化,促進(jìn)系統(tǒng)炎癥的加強(qiáng),促進(jìn)甲狀腺

8、炎的發(fā)生。
　　目的:腫瘤炎癥一直以來被認(rèn)為是促進(jìn)腫瘤發(fā)生和發(fā)展的關(guān)鍵因素。腫瘤部位的腫瘤炎癥調(diào)節(jié)機(jī)制復(fù)雜,包括細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò),微小RNA,小分子物質(zhì)或者微顆粒(micorparticles,MPs)的釋放等等,但這些機(jī)制均未被充分闡明。近年來發(fā)現(xiàn),腫瘤細(xì)胞通過自身表達(dá)Toll樣受體(Toll-likereceptor,TLR),促進(jìn)腫瘤的發(fā)展和轉(zhuǎn)移,介導(dǎo)腫瘤部位的腫瘤炎癥。但是,TLR信號(hào)是否同樣具有負(fù)性調(diào)節(jié)腫瘤炎癥的作用不得而知

9、。同時(shí),近年來發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞可以在受到刺激或者凋亡時(shí)通過微顆粒的釋放,調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境的免疫反應(yīng)。本研究通過對(duì)小鼠肝癌細(xì)胞的TLR的信號(hào)通路以及其所產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng),探討TLR4信號(hào)對(duì)于微顆粒的釋放的影響,以及其在腫瘤局部炎癥中的負(fù)性調(diào)節(jié)作用。
　　材料和方法:首先利用TLR4受體的特異性刺激物脂多糖(LPS)刺激小鼠肝癌細(xì)胞系H22,利用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)H22細(xì)胞在刺激下的微顆粒釋放情況以及其可能的介導(dǎo)機(jī)制;再通過微小RNA基因芯片

10、技術(shù),分析微顆粒中包含的內(nèi)容物的微小RNA的表達(dá)情況,尋找差異最大的微小RNA。最后,在體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)下,觀察TLR4信號(hào)通路下釋放的微顆粒所產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng)以及其中微小RNA的“生物傳遞”作用。
　　結(jié)果:在LPS刺激作用下,H22細(xì)胞釋放微顆粒的數(shù)目明顯增多。TLR信號(hào)可以通過MyD88通路向下傳遞信號(hào)到細(xì)胞骨架蛋白,使得肌動(dòng)蛋白輕鏈磷酸化,導(dǎo)致微顆粒的釋放增多。而腫瘤部位的巨噬細(xì)胞在吞噬腫瘤來源的微顆粒后,下調(diào)表達(dá)炎癥因子白