經(jīng)典Wnt信號通路在大鼠缺血性腦卒中后血管新生中的作用研究.pdf

1、研究背景:腦卒中已成為嚴(yán)重威脅我國人民健康的重大疾病，在我國已經(jīng)超心腦血管疾病和腫瘤疾病成為第一大致殘病因和第二大致死病因，給家庭和社會帶來沉重打擊和嚴(yán)重負(fù)擔(dān)。其中缺血性卒中發(fā)生率占60％～80％，長期以來一直缺乏有效的治療手段。目前神經(jīng)科學(xué)研究的重要課題已經(jīng)重點(diǎn)著眼于如何有效地減輕腦缺血再灌注損傷與如何提高腦卒中患者的康復(fù)。腦缺血可啟動缺血周圍組織的再生反應(yīng)包括神經(jīng)再生和血管新生。血管新生是一種動態(tài)的復(fù)雜過程，由多種細(xì)胞因子和多種細(xì)胞

2、成分參與，血管新生的起始的中心環(huán)節(jié)是血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移、分化和管腔形成。在血管內(nèi)皮細(xì)胞所處的微環(huán)境中，促進(jìn)血管形成的因子與對抗血管形成的因子總是處于動態(tài)平衡。腦損傷后，血管新生開始參與修復(fù)過程并在其中扮演重要作用，盡管如此，機(jī)體代償性血管新生在缺血性腦卒中后常常是不足的，腦缺血后腦血管新生機(jī)制需進(jìn)一步研究。在調(diào)控細(xì)胞增殖分化中，經(jīng)典的Wnt/β-catenin信號通路是的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。近年來，關(guān)于腦血管的發(fā)育的研究也表明，Wnt/β-

3、catenin號通路在調(diào)節(jié)腦血管生成、血-腦屏障的形成及其生物學(xué)特征維持起關(guān)鍵性作用，Wnt/β-catenin信號通路對腦血管的特異性結(jié)構(gòu)血腦屏障的形成及維持作用巨大。雖然Wnt/β-catenin信號通路在腦血管的發(fā)育過程中起著至關(guān)重要的作用，但是在成年動物腦缺血后的血管新生中，該信號通路是否參與目前尚未見報道。
　　研究目的:采用局灶性腦缺血(MCAO)大鼠模型，研究經(jīng)典Wnt信號通路在大鼠缺血性腦卒中后血管新生中的作用。<

4、br>　　研究方法:實(shí)驗(yàn)用60只成年雄性Wistar大鼠，隨機(jī)分為4組:假手術(shù)組(Sham組)，腦缺血組對照組（MCAO組），腦缺血加氯化鋰干預(yù)組（LiCl組），腦缺血加DKK1干預(yù)組（DKK1組）。采用線栓法阻塞大鼠大腦中動脈，腦缺血90min后再灌注的手術(shù)方式，制備局灶性腦缺血模型。術(shù)后2h、1d、7d、14d的時間點(diǎn)對模型進(jìn)行神經(jīng)功能評分。術(shù)后1d，7d，14d時間點(diǎn)利用免疫印跡測缺血周邊腦組織全細(xì)胞與核內(nèi)β-catenin含量變

5、化。采用氯化鋰和DKK1干預(yù)，術(shù)后7d采用免疫印跡測缺血腦組織全細(xì)胞與核內(nèi)β-catenin含量和p-GSK-3β/GSK-3β比值的變化。氯化鋰和DKK1干預(yù)，術(shù)后14d采用FITC-dextran測缺血腦組織周邊血管密度和采用多普勒血流儀測其血流量的方法來反映血管新生情況。
　　研究結(jié)果:線栓阻塞法能建立穩(wěn)定的大鼠腦缺血再灌注模型，且組間差異小;術(shù)后2h和1d，神經(jīng)功能評分高于Sham組（P＜0.01），在再灌注7d，14d后

6、，神經(jīng)功能評分仍高于Sham組（P＜0.05);術(shù)后1d，缺血周邊腦組織細(xì)胞總蛋白及細(xì)胞核蛋白中β-catenin表達(dá)水平顯著下降（P＜0.01），術(shù)后7d明顯恢復(fù)(P＜0.05)，14天接近正常(P＞0.05）。應(yīng)用經(jīng)典Wnt通路激活劑LiCl干預(yù)后，β-catenin表達(dá)水平及p-GSK-3β/GSK-3比值顯著提高（P＜0.01），術(shù)后14d腦組織缺血周邊血管密度及血流量顯著增強(qiáng)（P＜0.05);應(yīng)用經(jīng)典Wnt通路抑制劑DKK1干

7、預(yù)后變化則相反即:β-catenin表達(dá)水平及p-GSK-3β/GSK-3β比值顯著降低（P＜0.01），血管密度及血流量顯著下降（P＜0.05)。
　　研究結(jié)論:采用線栓法阻塞大腦中動脈90min后再灌，可建立簡易而穩(wěn)定的理想腦缺血模型，此方法可重復(fù)性強(qiáng)，適合廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn)研究。在缺血性腦卒中急性損傷期，經(jīng)典Wnt信號通路活性下降;而在恢復(fù)期經(jīng)典Wnt信號通路活性逐漸恢復(fù)。增強(qiáng)經(jīng)典Wnt信號通路活性，可促進(jìn)缺血周邊的腦組織