黃淮海大豆高異黃酮種質篩選與相關基因差異表達分析.pdf

1、大豆(Glycine max L.)是我國廣泛種植的經濟作物，具有豐富的蛋白質和脂肪，其子粒中含有的生理活性物質——異黃酮更是被廣泛應用于保健行業(yè)和醫(yī)學領域。異黃酮屬于生物黃酮的一種，只能在植物體內合成。本研究利用高效液相色譜技術(HPLC)分析黃淮海生態(tài)區(qū)大豆品種資源子粒異黃酮含量，遴選高、低異黃酮含量特異種質;在此基礎上，采用實時定量PCR技術分析異黃酮代謝途徑相關基因在高、低異黃酮含量品種中的差異表達，尋找關鍵基因;并利用RNAi

2、技術將低異黃酮含量大豆品種的異黃酮合成重要分支基因進行沉默。主要研究結果如下:
　　1.利用精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性和回收率試驗，確定了HPLC方法及條件。精密度試驗的相對標準偏差(RSD)分別為0.96％、1.53％和1.31％;重現(xiàn)性試驗的RSD分別為1.89％、1.85％和1.65％;日內穩(wěn)定性RSD為1.76％、0.89％和1.27％，日間穩(wěn)定性RSD分別為0.98％、1.28％和1.02％;大豆苷、黃豆黃苷和染料木苷的加標

3、回收率分別為98.91％、99.93％和101.46％，相對應的RSD值為1.42％、1.89％和1.73％?？梢?，該方法可靠性高、穩(wěn)定性強，可用于大豆異黃酮測定。
　　2.利用HPLC技術測定了黃淮海生態(tài)區(qū)213份大豆品種資源異黃酮含量。野生大豆異黃酮含量分布在3896～7440μg/g，平均含量超過5000μg/g，最大差異達3544.3μg/g（約1.9倍）;栽培大豆異黃酮含量分布在1463～6116μg/g，平均含量超過3

4、500μg/g，最大差異可達4652.9μg/g（約4.2倍）。在此基礎上，遴選出異黃酮含量超過6000μg/g特異種質4份，其中超過7000μg/g種質1份。
　　3.利用實時定量PCR技術分析了異黃酮合成途徑相關基因在不同大豆品種、發(fā)育時期、組織部位中的表達差異。其中PAL、C4H、4CL基因在高異黃酮含量大豆品種R2時期的表達量顯著高于低異黃酮品種;CHS、IFS在高異黃酮大豆品種R8時期的表達量顯著高于低異黃酮品種;CPR