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文檔簡介
1、近年來,作為哮喘慢性化、嚴重化、持續(xù)化的病理基礎,氣道重塑在哮喘防治中的潛在作用被廣為關注。它不僅是激素抵抗性哮喘的病理基礎,也是不可逆性氣道阻塞和氣道高反應性的病理基礎。作為Vit-D在體內(nèi)極其重要的的代謝產(chǎn)物之一,骨化三醇(羅蓋全,Rocalirol)在哮喘的治療中不僅對于氣道慢性炎癥而且對于免疫應答均起到一定的調(diào)節(jié)作用。但至今國內(nèi)外均未見關于骨化三醇對哮喘氣道重塑的報道。該研究設計從體內(nèi)、外兩個方面觀察骨化三醇對支氣管哮喘氣道重塑
2、的影響,并進一步探討其作用機制,為推廣其臨床應用提供依據(jù)。
該項內(nèi)容分為兩個部分:
第一部分,骨化三醇調(diào)節(jié)哮喘小鼠氣道重塑及NF-κB信號通路的研究
目的:觀察骨化三醇對哮喘小鼠氣道重塑的影響,并進一步探討其機制。方法:實驗小鼠隨機分為對照組、哮喘組和VD組。采用卵白蛋白致敏及激發(fā)的方法制備小鼠哮喘氣道重塑的模型;選擇HE染色法觀察氣道壁病理改變;Masson染色觀察氣道壁膠原染色情況,AB-PAS染色觀察
3、杯狀細胞增生情況,計算機圖像分析系統(tǒng)測定氣道形態(tài)學指標,蛋白免疫印記法檢測NF-κB p65的蛋白水平。結果:(1)骨化三醇對哮喘氣道重塑具有部分逆轉的作用;(2)骨化三醇能明顯抑制哮喘肺組織NF-κB p65的核易位。結論:骨化三醇的干預可顯著減輕哮喘氣道重塑的病理改變;這一作用可能與其對哮喘肺內(nèi)NF-κB活化的抑制作用有關。
第二部分,骨化三醇對哮喘小鼠氣道平滑肌細胞凋亡及NF-κB信號通路的影響
目的:檢測骨化
4、三醇對哮喘小鼠氣道平滑肌細胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)的凋亡及其核轉錄因子-κB信號通路的影響,從細胞及分子兩個水平探究Rocalirol對哮喘氣道重塑的可能作用機制。方法:原代培養(yǎng)正常及哮喘小鼠ASMCs,以Rocalirol作為干預因素。流式細胞儀測定細胞凋亡,熒光顯微鏡觀察細胞凋亡形態(tài)學變化;凝膠遷移滯后實驗(EMSA法)檢測NF-κB的DNA結合活性;實時熒光定量RT-PCR法和蛋白免疫
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