基于形態(tài)與分子技術相結合的葉螨鑒定法研究.pdf

1、葉螨屬于節(jié)肢動物門（Arthropoda）、蛛形綱(Arachinida)、蜱螨亞綱（Acari）、真螨總目（Acariformes）、絨螨目（Trombidiformes）、前氣門亞目（Prostigmata）、異氣門總股（Eleutherengonides）、葉螨科(Tetranychidae)，是一種危害蔬菜、果樹、豆科植物和觀賞性植物的重要農業(yè)害蟲。在實行植物檢疫過程中，由于不同種類葉螨的形態(tài)特征相似度高，因而往往找不到好的鑒別

2、特征。一般來說，葉螨屬的葉螨主要是通過雄蟲外生殖器陽具端錘的性狀來進行鑒定，但是形態(tài)學鑒定局限于特定的發(fā)育階段，且對于親緣關系較近的物種或隱存種區(qū)分困難。例如二斑葉螨(Tetranychusurticae Koch)和朱砂葉螨（Tetranychus cinnabarinus Boisduval）具有非常相似的形態(tài)特征，在傳統(tǒng)葉螨分類研究中常引起分類學家的意見分歧。
　　為了解決形態(tài)學鑒定問題，越來越多的分子標記技術被應用于蜱螨鑒

3、定。其中限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈式反應技術(PCR-RFLP)被認為是有效區(qū)分葉螨屬種類的鑒定手段?；贒NA序列差異的葉螨鑒定方法相對于傳統(tǒng)鑒定方法而言，具有便捷、快速、穩(wěn)定等特點，其中核糖體DNA應用較為廣泛。核糖體DNA主要包括18S、5.8S和28S rRNA及內轉錄間隔區(qū)ITS1和ITS2。由于ITS序列具有種內變異小，種間變異大的特性，為葉螨屬鑒定提供了更為可靠的分子標記。
　　本研究通過形態(tài)學和分子生物學相結合的

4、鑒定手段，對不同寄主、地理區(qū)域的葉螨種類進行了鑒定。旨在探索兩項技術的結合是否可以對葉螨屬內6個物種（盧氏葉螨Tetranychus ludeni、豆葉螨Tetranychus phaselus、神澤氏葉螨Tetranychus kanzawai,二斑葉螨Tetranychus urticae、截形葉螨Tetranychus truncatus和皮氏葉螨Tetranychuspiercei）進行準確鑒定。另外，我們檢測和分析了種間ITS

5、序列的差異，綜合考慮DNA多態(tài)性及酶切片段特異性等特點，最終篩選到3個限制性內切酶(RsaI、DdeI、MfeI)用于建立RFLP圖譜。
　　研究表明兩項技術的結合能夠準確鑒定出這6個物種，且基于ITS構建的系統(tǒng)發(fā)育分析結果也支持了形態(tài)上鑒定的種，除了外群柑橘全爪螨和桑全爪螨處于同一進化支上，其他物種都以較高的置信度形成一個單系，而且ITS序列在種間顯示出較高的多態(tài)性，即該基因在葉螨鑒定方面突顯出獨特的優(yōu)勢。綜上所述，分子鑒定方法