PD98059和LY294002對子宮內(nèi)膜癌裸鼠移植瘤的抑制作用.pdf

1、背景與目的:
　　 子宮內(nèi)膜癌是常見的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一,發(fā)病率逐年上升,無孕激素拮抗的高雌激素長期作用可引起子宮內(nèi)膜向惡性轉(zhuǎn)化、增加患子宮內(nèi)膜癌的風(fēng)險(xiǎn),但其確切機(jī)制尚不十分清楚。近年來,信號傳導(dǎo)通路與子宮內(nèi)膜癌的關(guān)系受到越來越多學(xué)者的重視,研究發(fā)現(xiàn),絲裂原活化蛋白激酶通路(mitogenactivated protein kinase,MAPK)、磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol3-kinase

2、,PI-3K)／蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)通路等的異?；罨c子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中存在細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(extracellular-regulated kinase,ERK)和AKT的異?；罨?選擇性通路抑制劑PD98059和LY294002能抑制體外培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡,但體內(nèi)實(shí)驗(yàn)觀察MAPK、PI3K信號傳導(dǎo)通路抑制劑PD98059、LY2940

3、02對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖凋亡影響的研究,國內(nèi)外鮮見報(bào)道。本研究將人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株Ishikawa進(jìn)行體外培養(yǎng)后接種于裸鼠皮下,建立裸鼠動物腫瘤模型,通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)觀察抑制劑PD98059和LY294002對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖凋亡及磷酸化ERK(p-ERK)和磷酸化AKT(p-AKT)表達(dá)的影響,初步探討其治療子宮內(nèi)膜癌的可能性。
　　 材料與方法:
　　 1、材料
　　 人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系Ishikawa由北京大

4、學(xué)人民醫(yī)院婦產(chǎn)科實(shí)驗(yàn)室魏麗惠教授惠贈。24只4-6周雌性BALB／c裸鼠由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限責(zé)任公司提供,體質(zhì)量15-20g,飼養(yǎng)于河南省實(shí)驗(yàn)動物中心清潔級動物室內(nèi)(SPF級)。
　　 2、方法
　　 將Ishikawa細(xì)胞懸液接種于24只裸鼠皮下,建立裸鼠人子宮內(nèi)膜癌移植瘤模型,后將其隨機(jī)分為4組,每組6只,分別給予腹腔注射生理鹽水、PD98059(50mg／kg)、LY294002(50mg／kg)及PD9

5、8059+LY294002(PD98059、LY294002各50mg／kg)等干預(yù),觀察各組移植瘤的生長情況,繪制腫瘤生長曲線,計(jì)算移植瘤體積、抑瘤率等,觀察各組藥物對移植瘤的抑制作用,移植瘤組織標(biāo)本進(jìn)行HE染色觀察腫瘤組織的形態(tài)學(xué)變化,用原位末端標(biāo)記(TUNEL)法檢測移植瘤組織的細(xì)胞凋亡情況,用免疫組織化學(xué)SP法檢測移植瘤組織內(nèi)p-ERK蛋白和p-AKT蛋白的表達(dá)情況。
　　 3、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　 采用SPSS17

6、.0軟件進(jìn)行正態(tài)分布,方差齊性檢驗(yàn),單因素方差分析,等級資料的秩和檢驗(yàn),組間的兩兩比較采用LSD法,a=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　 結(jié)果:
　　 1、各用藥組裸鼠移植瘤體積增長相對緩慢[LY98059組(2027.30±251.16)mm3,PD294002組(1874.56±485.03)mm3,PD98059+LY294002組(997.54±328.91)mm3],對照組腫瘤體積增長明顯[(3110.60±599.

7、66)mm3],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=23.545,P<0.001)；各組抑瘤率分別為LY294002組(32.49±16.39)％,PD98059組(38.11±16.90)％,PD98059+LY294002組(67.98±9.09)％,聯(lián)合用藥組的抑瘤率明顯高于PD98059組和LY294002組(F=10.283,P<0.05)。
　　 2、HE染色光鏡下觀察見移植瘤組織形態(tài)與人子宮內(nèi)膜腺癌組織的病理形態(tài)一致,病理上證實(shí)

8、為人子宮內(nèi)膜腺癌裸鼠移植瘤模型；用藥組腫瘤細(xì)胞稍大,部分細(xì)胞核固縮、裂解,可見凋亡和壞死細(xì)胞；腫瘤組織內(nèi)可見較多的壞死組織和炎性細(xì)胞浸潤,有明顯的纖維化形成,表明腫瘤細(xì)胞的生長受到抑制。
　　 3、原位末端標(biāo)記(TUNEL)結(jié)果顯示,各用藥組凋亡指數(shù)分別為PD組(14.12±1.22)％、LY組(13.70±1.47)％、PD+LY組(28.96±1.83)％,均明顯高于對照組(3.31±1.16)％(F=320.344,P<0

9、.001),聯(lián)合用藥組凋亡指數(shù)高于單藥組(F=194.366,P<0.001)。
　　 4、免疫組化結(jié)果顯示,p-ERK、p-AKT均在胞漿表達(dá),各用藥組p—ERK和p—AKT的表達(dá)均低于對照組[p-ERK(x2=10.261,P<0.05),p-AKT(x2=7.049,P<0.05)],其中聯(lián)合用藥組蛋白的表達(dá)均最低。
　　 結(jié)論:
　　 1.通路抑制劑PD98059和LY294002可通過阻斷細(xì)胞信號傳導(dǎo)通