糖基化終產(chǎn)物促進(jìn)氧化型低密度脂蛋白誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞泡沫化與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激.pdf

1、目的:觀察羧甲基賴氨酸(Carboxymethyl-lysine，CML)對荷脂巨噬細(xì)胞脂質(zhì)調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)運(yùn)子的影響及干預(yù)巨噬細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激發(fā)生的作用，探討糖基化終產(chǎn)物致動脈粥樣硬化發(fā)生的相關(guān)機(jī)制。
　　方法:使用4-6代RAW264.7細(xì)胞株，巨噬細(xì)胞復(fù)蘇后進(jìn)行連續(xù)培養(yǎng)，根據(jù)干預(yù)條件不同分為對照組、oxLDL組，CML+ oxLDL混合干預(yù)組。分別用不同濃度CML和氧化型低密度脂蛋白孵育細(xì)胞48小時(shí)后，用油紅O染色鑒定泡沫細(xì)胞形成，膽固

2、醇檢測試劑盒檢測各組細(xì)胞中游離膽固醇(FC)、膽固醇酯(CE)、總膽固醇(TC)濃度來選擇能誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞源性泡沫化的最佳濃度。利用流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測各組細(xì)胞氧化型低密度脂蛋白受體CD36和三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)子ABCA1表達(dá)量的變化;實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測定各組內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激分子C/EBP同源蛋白(CHOP)、PKR樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶(PERK)的表達(dá)量。
　　結(jié)果:油紅染色顯示小鼠巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞誘導(dǎo)成功，膽固醇試劑盒檢測顯示

3、50μg/mL oxLDL+10μM CML可誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞最大泡沫化。糖基化終產(chǎn)物影響膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)，與對照組和oxLDL單獨(dú)干預(yù)組相比，oxLDL+CML共處理巨噬細(xì)胞組中CD36的表達(dá)顯著升高(P＜0.05)，同時(shí)三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)子ABCA1的表達(dá)量顯著降低(P＜0.05）。oxLDL+ CML共處理RAW264.7細(xì)胞較oxLDL單獨(dú)干預(yù)組顯著上調(diào)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志分子CHOP、PERK的表達(dá)(P＜0.05)。