豹皮樟總黃酮血清對(duì)TGF-β1干預(yù)的大鼠肝星狀細(xì)胞的作用及部分機(jī)制.pdf

1、肝纖維化是肝臟受到慢性損傷時(shí)，針對(duì)損傷因子所產(chǎn)生的一個(gè)自我愈合過(guò)程，同時(shí)又是所有慢性肝病進(jìn)展成肝硬化的共同病理基礎(chǔ)與必經(jīng)階段，是影響慢性肝病預(yù)后的重要環(huán)節(jié)。目前認(rèn)為肝纖維化可以逆轉(zhuǎn)，常規(guī)的病程是肝纖維化、肝硬化直至惡變?yōu)楦伟?。我?guó)是肝病高發(fā)國(guó)家，以慢性乙型、丙型病毒性肝炎最為常見(jiàn)，嚴(yán)重影響著我國(guó)人民的生命質(zhì)量和勞動(dòng)力水平，在當(dāng)前尚無(wú)良好抗病毒方法的情況下，阻止或逆轉(zhuǎn)肝纖維化進(jìn)程已成為慢性肝病相當(dāng)重要的治療對(duì)策。
　　 肝纖維化的

2、病理學(xué)基礎(chǔ)為細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）合成增加，降解減少，導(dǎo)致膠原過(guò)度沉積。而肝臟內(nèi)主要膠原合成細(xì)胞——肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cells，HSC）的激活、增殖則是肝纖維化發(fā)生的中心環(huán)節(jié)。慢性肝損傷后，HSC在某些激動(dòng)因子作用下，形態(tài)與功能表型發(fā)生較大改變，其中又以細(xì)胞活化增殖、表達(dá)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）及ECM生成增多為最顯

3、著的活化特征。HSC的活化是由靜止HSC向肌成纖維細(xì)胞（myofibroblaster，MFB）轉(zhuǎn)化的過(guò)程，依賴于眾多細(xì)胞因子的網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)中，目前認(rèn)為轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）是肝纖維化形成的關(guān)鍵因子，結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（CTGF）作為TGF-β的下游效應(yīng)介質(zhì)，主要介導(dǎo)TGF-β的促纖維化作用，TGF-β可通過(guò)多種信號(hào)傳導(dǎo)途徑誘導(dǎo)CTGF的表達(dá)以發(fā)揮促纖維化的作用。
　　 隨著肝纖維化發(fā)生機(jī)制的逐漸闡明，使肝纖維化的預(yù)防，治療，

4、甚至逆轉(zhuǎn)成為可能。但迄今為止，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)尚無(wú)良好治療方法，而中醫(yī)中藥對(duì)肝纖維化的良好預(yù)防和治療效果及低毒性反應(yīng)等特點(diǎn)目前已引起國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注。近年來(lái)，大量實(shí)驗(yàn)與臨床研究證實(shí)運(yùn)用活血化瘀為主的方法治療肝纖維化均取得了較好療效。豹皮樟，又名老鷹茶，系樟科木姜子屬毛豹皮樟的葉，是我國(guó)南方各民族民間長(zhǎng)期飲用的一種植物代用茶，具有清涼止渴、解毒消腫、明目健胃等功效。老鷹茶中含有多種有效成分，經(jīng)我院天然藥物化學(xué)室研究，確定了豹皮樟的有效部位為總

5、黃酮。目前關(guān)于老鷹茶的實(shí)驗(yàn)研究較少，我院前期研究表明豹皮樟總黃酮具有顯著的抗氧化和抗炎免疫作用，對(duì)酒精性脂肪性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、肝纖維化均具有較好的防治作用。
　　 中醫(yī)中藥抗肝纖維化研究業(yè)已取得可喜成果，但中藥作用機(jī)制及有效物質(zhì)的研究一直是中藥新藥開發(fā)與中藥研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。中藥復(fù)方尤其是較粗的制劑含有較多的雜質(zhì)，如直接加入體外反應(yīng)體系，其酸堿度、滲透壓、鞣質(zhì)和無(wú)機(jī)鹽等非特異性理化因素將嚴(yán)重干擾實(shí)驗(yàn)，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)的假陽(yáng)性或

6、假陰性結(jié)果。1984年血清藥理學(xué)方法在日本提出后，對(duì)準(zhǔn)確再現(xiàn)中藥復(fù)方在體內(nèi)發(fā)揮作用的“有效成份”提供了一種有力的工具。
　　 為進(jìn)一步闡明豹皮樟總黃酮影響肝纖維化的作用機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)采用血清藥理學(xué)方法，在細(xì)胞及分子水平上探討了豹皮樟總黃酮對(duì)肝星狀細(xì)胞的作用。
　　 主要內(nèi)容如下：
　　 1.豹皮樟總黃酮血清對(duì)TGF-β1干預(yù)的大鼠肝星狀細(xì)胞活化增值及α-SMA和Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)的影響健康成年SD大鼠隨機(jī)分

7、為4組：正常組、TFLC低（1g/kg）、中（2g/kg）、高（4g/kg）劑量組，給藥4天后取大鼠血清作用于TGF-β1干預(yù)的HSC，MTT法檢測(cè)HSC的增值、半定量RT-PCR法檢測(cè)HSC中α-SMA、Ⅰ型膠原及Ⅲ型膠原mRNA的表達(dá)。結(jié)果含藥血清各劑量組能明顯抑制HSC-T6的增值和α-SMA、Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原mRNA的表達(dá)。提示，TFLC血清可抑制HSC的活化增值及膠原分泌。
　　 2.豹皮樟總黃酮血清對(duì)TGF-β1

8、干預(yù)的大鼠肝星狀細(xì)胞TβR1/CTGF 及Smad信號(hào)通路的影響健康成年SD大鼠隨機(jī)分為4組：正常組、TFLC低（1g/kg）、中（2g/kg）、高（4g/kg）劑量組，給藥4天后取大鼠血清作用于TGF-β1干預(yù)的HSC，半定量RT-PCR法檢測(cè)HSC中TβR1、CTGF、Smad2、Smad3及Smad7 mRNA的表達(dá)。Western-blot方法檢測(cè)HSC中TGF-β、CTGF蛋白的表達(dá)。結(jié)果表明，各劑量組TFLC血清均能明顯下調(diào)