Caveolin-1及p-ERK在TRPC6促進腎小球系膜細胞增殖中的作用.pdf

1、目的:研究AngII誘導腎小球系膜細胞(GMC)的增殖機制,探討小窩在GMC增殖中的信號轉(zhuǎn)導作用及小窩、Caveolin-1、P-ERK1/2(活化的ERK1/2)、TRPC6在AngII誘導GMC增殖中的作用。
　　方法:實驗分為:空白對照組(Con組)、AngII刺激組(AngII組)、PD98059(P-ERK1/2抑制劑)預處理組(PD98059組)、MβCD(小窩結(jié)構(gòu)破壞劑)預處理組(MβCD組)。根據(jù)預實驗選定AngI

2、I10-7mol/L作用GMC24h作為細胞的增殖模型(AngII組)。PD98059組及MβCD組分別用PD9805950uM及MβCD10mM預處理GMC1h后,用10-7mol/LAngII刺激24h。四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT法)檢測GMC增殖。免疫熒光檢測Caveolin-1、P-ERK1/2、TRPC6的定位。實時熒光定量PCR檢測Caveolin-1、TRPC6mRNA的表達。Western Blot檢測Caveolin

3、-1、P-ERK1/2、TRPC6蛋白表達。
　　結(jié)果:(1)AngII組可以明顯促進GMC的增殖(P<0.05),而PD98059組及MβCD組,明顯抑制AngII對GMC的增殖作用,抑制率達到31.06％(P<0.01)及48.96%(P<0.01)。
　　(2)GMCOD值與TRPC6蛋白表達水平呈正相關(guān)(R=0.907,P<0.01)。
　　(3)AngII對P-ERK1/2影響:AngII刺激GMCP-ERK

4、1/2升高,15分鐘達到峰值(P<0.01),隨后降低接近基礎(chǔ)水平。PD98059組及MβCD組均可明顯降低P-ERK1/2水平(P<0.01)。
　　(4)AngII對Caveolin-1mRNA及蛋白的影響:AngII刺激GMC,Caveolin-1mRNA水平升高,8h后開始降低;而蛋白先下降,4h蛋白水平降到最低,后升高接近基礎(chǔ)水平。
　　(5)AngII組P-ERK1/2、TRPC6蛋白水平均較Con組明顯升高(P

5、<0.01),Caveolin-1蛋白較Con組降低(P<0.01)。PD98059組明顯降低P-ERK1/2及TRPC6的蛋白水平,升高Caveolin-1蛋白。MβCD組降低P-ERK1/2及TRPC6蛋白表達,對Caveolin-1蛋白沒有明顯作用(P>0.05)。TRPC6mRNA與TRPC6蛋白趨勢一致(P<0.05)。
　　結(jié)論:(1)MβCD通過破壞小窩結(jié)構(gòu),降低P-ERK1/2及TRPC6表達,抑制GMC增殖,說明