高鉀溶液對慢性非細菌性前列腺炎SD大鼠前列腺平滑肌細胞內鈣離子濃度的影響及意義.pdf

1、目的：建立慢性非細菌性前列腺炎大鼠模型,探討SD大鼠慢性非細菌性前列腺炎前列腺平滑肌細胞(PSMC)內游離鈣離子濃度([Ca2+]i)在高鉀溶液作用下的變化及臨床意義。
　　方法：將SD大鼠隨機分為實驗組和對照組,每組20只。實驗組行去勢手術,十周切口愈合后腹腔注射17-β雌二醇0.25mg/kg次/d,對照組每只大鼠腹腔注射生理鹽0.6ml每日一次。連續(xù)注射30d后,CO2吸入處死,于無菌條件下迅速取出前列腺背外側葉組織置入D-

2、Hanks液,轉入無菌室超凈臺,除去前列腺的血管、被膜及脂肪等組織,每只大鼠取部分組織行HE染色,石蠟包埋切片后行組織學觀察。體外培養(yǎng)純化PSMC,在細胞傳代至共聚焦專用培養(yǎng)皿中第3天,棄去培養(yǎng)液,避光條件下加入4μl Quest Fluo-8TM和500μl NPSS,使其終濃度為0.5μmol/l,并置于培養(yǎng)箱中靜置孵育1h,然后用無Ca2+Crebs洗滌,向共聚焦專用培養(yǎng)皿中加入1ml Crebs,轉移至激光共聚焦顯微鏡上,激發(fā)波

3、長為488nm,選擇512×512像素采集二維圖片,每10S掃描一幀,觀測細胞內鈣離子熒光強度。檢測基線后,緩慢向共聚焦專用培養(yǎng)皿中加入高鉀溶液250μl,使其終濃度為60mmol/L。每視野選取5個細胞,觀測鈣離子熒光強度的變化情況,所得圖片應用激光共聚焦顯微鏡專用軟件轉化為實驗數據,取平均值。采用SPSS18.0軟件進行分析,實驗數據以x±s表示,采用單因素成組資料的t檢驗。
　　結果：光鏡下顯示實驗組標本具有典型慢性前列腺炎

4、(CP)的病理特征,對照組未見炎癥表現(xiàn)。采用免疫細胞化學方法證實實驗組和對照組為前列腺平滑肌細胞。實驗組和對照組PSMC內鈣離子熒光強度升高幅度分別為27.86±9.88和7.61±4.31,組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　結論：采用去勢+雌二醇注射的方法可成功建立CP模型。CAPSD大鼠PSMC內[Ca2+]i在高鉀溶液作用下的升高幅度明顯大于正常對照組,高鉀溶液引起細胞外鈣離子的跨膜內流,導致細胞內鈣離子濃度升高,