小鼠真菌性角膜炎的拉曼光譜分析及真菌毒素檢測.pdf

1、目的:建立小鼠茄病鐮刀菌性角膜炎模型后，觀察在真菌性角膜炎(fungal keratitis,FK)病變發(fā)展中角膜組織中生化物質(zhì)及真菌毒素的表達(dá)情況，以進(jìn)一步探討FK的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制。
　　方法：按照隨機(jī)數(shù)表法將BALB/C小鼠分成2組：一組為真菌感染組（即實(shí)驗組）：另一組為損傷對照組（即對照組）。兩組均采用“改良角膜表面鏡片法”造模。在真菌感染后第1、3、5、7、12天采用半定量方法分別對角膜的臨床表現(xiàn)進(jìn)行評分，并對角膜刮片物行

2、病原學(xué)檢查。同時在相應(yīng)時間點(diǎn)取下小鼠實(shí)驗眼角膜，用拉曼光譜分析離體角膜在相應(yīng)病程中生化物質(zhì)組成的變化情況。采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測鐮刀菌酸(FA)、伏馬菌素B1(FB1)、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)和玉米赤霉烯酮(ZEN)4種真菌毒素在不同病程中的感染角膜組織中的表達(dá)。
　　結(jié)果：1.實(shí)驗組小鼠角膜均成功感染接種的真菌，具有典型的FK臨床表現(xiàn)。在真菌感染早期，角膜表現(xiàn)為彌漫性炎癥反應(yīng)，隨后浸潤混濁加重，第3天角膜呈灰白色混

3、濁，第5天時角膜潰瘍灶擴(kuò)大，表面干燥、略隆起，新生血管從周邊角膜開始長入，第7天時病變好轉(zhuǎn)，潰瘍灶面積縮小，第12天時病變穩(wěn)定，角膜病灶瘢痕化，角膜呈白斑。臨床評分情況：除感染后第3天與第7天的臨床評分差異無統(tǒng)計學(xué)意義外，其余各時間點(diǎn)評分差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。2.拉曼光譜分析結(jié)果：正常角膜與實(shí)驗組第1天病變角膜相比853cm-1（歸屬于酪氨酸）和940cm-1（歸屬于脯氨酸、纈氨酸）處的譜峰強(qiáng)度差別不大，但在FK第3天時這

4、兩個峰的強(qiáng)度出現(xiàn)下降，F(xiàn)K第5天和第7天這兩個峰的強(qiáng)度與FK第3天相比雖然變化不大但均比正常及FK第1天強(qiáng)度低。在正常角膜和FK病程第1天的角膜組織中可發(fā)現(xiàn)有1244cm-1（歸屬于膠原）處的譜峰，但在FK病程第3、5、7天均未發(fā)現(xiàn)有該處譜峰的存在。在1448cm-1（歸屬于磷脂質(zhì)）處的拉曼譜峰，正常角膜與 FK病程第1、3、5、7天相比該峰的強(qiáng)度均無明顯變化。3.真菌毒素檢測結(jié)果：在FK所有病程中均未檢測出FA、DON及ZEN；在FK