PARK2基因在錳致大鼠紋狀體神經(jīng)細(xì)胞功能影響中的作用.pdf

1、目的：利用慢病毒介導(dǎo)RNAi技術(shù)，構(gòu)建PARK2長時(shí)間沉默的神經(jīng)細(xì)胞，研究錳在不同濃度，相同時(shí)間條件下對DA能神經(jīng)元功能的影響。為后期研究PARK2錳致神經(jīng)毒性效應(yīng)機(jī)制打基礎(chǔ)。
　　方法：設(shè)計(jì)PARK2基因shRNA靶點(diǎn)，采用干擾效率最高的一對shRNA慢病毒干擾載體感染紋狀體神經(jīng)細(xì)胞，采用蛋白印跡法（Western Blot）和實(shí)時(shí)熒光定量（Real Time PCR）方法驗(yàn)證沉默效果。用不同濃度錳（0、300μmol/L和50

2、0μmol/L）處理三組大鼠紋狀體細(xì)胞[單純錳處理組（Mn）、PARK2 SiRNA干擾對照組（sh-C）及PARK2 SiRNA干擾組(sh)]，用Elisa法檢測各組細(xì)胞DA水平。
　　結(jié)果：PARK2干擾組PARK2 mRNA及表達(dá)產(chǎn)物Parkin蛋白較單純錳處理組及干擾對照組顯著下降（P＜0.05）；。結(jié)果顯示：單純錳處理組：當(dāng)錳濃度升高時(shí)，500μmol/L、300μmol/L與0相比，DA下降（P＜0.05）；PARK