SAMP8小鼠快速老化前期行為與形態(tài)學(xué)變化特征的研究.pdf

1、目的：應(yīng)用SAMP8小鼠為研究對象，聯(lián)合使用老化度評分、行為學(xué)實(shí)驗(yàn)、病理形態(tài)學(xué)和免疫組織化學(xué)等方法，觀察其在快速老化前期行為學(xué)及其海馬CA1區(qū)形態(tài)學(xué)的變化特征，為輕度認(rèn)知功能障礙(MCI)的研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 方法：選取健康雄性3、4、5、6、7月齡快速老化SAMP8小鼠各8只作為實(shí)驗(yàn)組（簡稱P8③組、P8④組、P8⑤組、P8⑥組、P8⑦組）。選取健康雄性3、4、5、6、7月齡SAMR1小鼠各8只作為同源正常對照組（簡稱R

2、1③組、R1④組、R1⑤組、R1⑥組、R1⑦組）。
　　 1.老化度評分：采用日本京都大學(xué)竹田俊男和細(xì)川昌則教授制定的老化度評分標(biāo)準(zhǔn)，將外在形體及行為的老化改變從反應(yīng)性、被動性逃避反應(yīng)、皮毛光澤、皮毛粗糙程度、脫毛程度、皮膚潰病、眼周損害、角膜混濁、角膜潰瘍、白內(nèi)障、脊柱后凸等11項(xiàng)進(jìn)行觀察，再根據(jù)程度不同，將每項(xiàng)指標(biāo)劃分為0～4級不等，標(biāo)定分值。根據(jù)這個評分標(biāo)準(zhǔn)客觀評分，積分越高則老化度越嚴(yán)重。
　　 2.Morris

3、水迷宮實(shí)驗(yàn)：將各組小鼠于迷宮實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下飼養(yǎng)2d。訓(xùn)練在每天上午8:00～12:00進(jìn)行。定位航行實(shí)驗(yàn)：將Morris水迷宮均分為4個象限，平臺放入第Ⅳ象限中。小鼠分別自4個象限面向池壁入水，視頻采集系統(tǒng)跟蹤并記錄找到平臺所需時間，實(shí)驗(yàn)進(jìn)行5天。空間探索實(shí)驗(yàn)：第6天，撤掉平臺，記錄小鼠120s內(nèi)跨越平臺的次數(shù)。
　　 3.組織切片制備及染色觀察：每組均取8只小鼠，4％水合氯醛腹腔注射麻醉，暴露胸腔，將輸液針刺入左心室，同時剪開右

4、心耳，用生理鹽水快速沖洗，4％多聚甲醛灌注。自上丘至視交叉節(jié)段取腦組織，用刀片把腦組織從正中矢狀位分為左右兩半，一半用于Golgi染色，一半制備成石蠟切片，分別用于Nissl染色和抗Aβ免疫組化染色。
　　 結(jié)果：
　　 1.老化度評分結(jié)果：SAMP8小鼠和SAMR1小鼠的老化度評分均隨月齡的增長而增加，但是增加程度不同。SAMP8小鼠從5月齡開始老化度評分隨月齡增長明顯增加，SAMR1小鼠隨月齡增長老化度評分略微增加。

5、其中P8④組與P8③組相比，老化度評分值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），略高于同月齡SAMR1小鼠的評分值(P＞0.05);P8⑤組評分值明顯高于P8④組和R1⑤組(P＜0.01);P8⑥組略高于P8⑤組（P＞0.05），但是明顯高于R1⑥組(P＜0.01)；P8⑦組顯著高于P8⑥組和R1⑦組(P＜0.01)。
　　 2.Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果：P8④組逃避潛伏期長于P8③組（P＞0.05），跨越平臺次數(shù)亦多于P8③組（P

6、＞0.05），與同齡對照組R1④組和R1③組相比，逃避潛伏期和跨越平臺次數(shù)差異無顯著性(P＞0.05);P8⑤組與P8④組和R1⑤組相比，逃避潛伏期均明顯延長（P＜0.01），跨越平臺次數(shù)明顯減少(P＜0.01)；P8⑥組與P8⑤組相比逃避潛伏期和跨越平臺次數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但是P8⑥組與R1⑥組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);P8⑦組逃避潛伏期顯著長于P8⑥組和R1⑦組(P＜0.01)，跨越平臺次數(shù)亦顯著少于P

7、8⑥組和R1⑦組(P＜0.01)。
　　 3.Golgi染色結(jié)果：P8③組和P8④組海馬CA1區(qū)第2、3級樹突棘形態(tài)規(guī)則，排列整齊，其樹突棘密度分別為0.84±0.07/μm、0.85±0.06/μm，兩組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），與同源對照R1⑧組、R1④組相比差異亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);P8⑤組樹突棘個數(shù)明顯減少，與P8④組和R1⑤組相比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；P8⑥組樹突棘同樣減少，與P8

8、⑤組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但是與R1⑥組相比，個數(shù)顯著減少(P＜0.01);P8⑦組樹突棘個數(shù)顯著減少，與P8⑥組和R1⑦組相比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　 4.Nissl染色結(jié)果：P8③組和P8④組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元尼氏體豐富致密，二者之間海馬神經(jīng)元數(shù)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），與同齡對照組相比之間差異亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；P8⑤組海馬神經(jīng)元胞漿內(nèi)尼氏體稀疏，神經(jīng)元出現(xiàn)丟失現(xiàn)象

9、，與P8④組和R1⑤組相比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0.05)；P8⑥組海馬神經(jīng)元個數(shù)與P8⑤組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但是與R1⑥組相比，個數(shù)顯著減少(P＜0.01)；P8⑦組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元較多核固縮，胞漿內(nèi)尼氏體減少，部分消失，細(xì)胞數(shù)量明顯減少，與P8⑥組和R1⑦組相比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 5.抗Aβ免疫組化結(jié)果：P8③組和P8④組之間Aβ陽性細(xì)胞數(shù)目及吸光度差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0

10、.05)，與同齡對照組相比差異亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);P8⑤組陽性細(xì)胞個數(shù)和吸光度與P8④組和R1⑤組相比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；P8⑥組Aβ陽性細(xì)胞數(shù)目及吸光度與P8⑤組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但是與R1⑥組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；P8⑦組Aβ陽性細(xì)胞數(shù)目及吸光度顯著大于P8⑥組和R1⑦組(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1.SAMP8小鼠從5月齡開始出現(xiàn)衰老

11、征象，表現(xiàn)為空間學(xué)習(xí)記憶的獲得和儲存能力下降，提示該鼠步入老化前期，7月齡時則表現(xiàn)出明顯的老化體征，學(xué)習(xí)記憶能力顯著下降，進(jìn)入快速衰老期。
　　 2.5、6月齡SAMP8小鼠出現(xiàn)海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的丟失和樹突棘數(shù)目的顯著減少，與學(xué)習(xí)記憶能力開始明顯下降的時間一致。
　　 3.5、6月齡SAMP8小鼠海馬CA1區(qū)Aβ陽性神經(jīng)元顯著增多，提示Aβ的神經(jīng)毒性作用可能是神經(jīng)元丟失和樹突棘數(shù)目減少的原因。
　　 4.SAM