糖尿病微血管并發(fā)癥中炎癥因子的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:糖尿病腎病(Diabetic nephropathy，DN)和糖尿病周?chē)窠?jīng)病變(Diabetic peripheral neuropathy，DPN)都是是糖尿病(diabetesmellitus，DM)最常見(jiàn)且較難治愈的微血管并發(fā)癥，也是導(dǎo)致終末期腎病和心血管事件的病因之一，更是致殘和致死的原因之一。近年來(lái)，糖尿病的發(fā)病呈逐年增高的趨勢(shì)，隨著病程的增長(zhǎng)，其慢性并發(fā)癥也愈加嚴(yán)重。據(jù)統(tǒng)計(jì)，病程在10年以上的糖尿病患者中有超過(guò)50％

2、的患者會(huì)出現(xiàn)糖尿病腎病，有超過(guò)30％的患者會(huì)出現(xiàn)糖尿病周?chē)窠?jīng)病變。因此，糖尿病并發(fā)癥的治療和預(yù)防即顯得尤為重要。但是，這些并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，尚未完全闡明。近年來(lái)，有研究認(rèn)為2型糖尿病(T2DM)是一種由糖代謝和脂代謝紊亂引起固有性免疫的長(zhǎng)期慢性激活導(dǎo)致的慢性炎癥反應(yīng)，而且在T2DM微血管并發(fā)癥DN和DPN的研究中也發(fā)現(xiàn)，免疫和炎癥反應(yīng)在其進(jìn)展中發(fā)揮了重要作用，如炎癥細(xì)胞的趨化、細(xì)胞因子的種類(lèi)等均與這些疾病有關(guān)。腫瘤壞死因子-α(T

3、NF-α)作為一種前炎癥因子已被證明參與DN的發(fā)生、發(fā)展。另外，單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)也是一種趨化單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的重要趨化因子，在腎小球內(nèi)，它可由TNF-α誘導(dǎo)，從而參與DN炎癥反應(yīng)的全過(guò)程。白細(xì)胞介素-12(IL-12)是一種多效性的細(xì)胞因子，具有增強(qiáng)免疫應(yīng)答和免疫調(diào)節(jié)作用。這些炎癥因子在不同并發(fā)癥進(jìn)展中的作用以及炎癥機(jī)制中的重要性還不十分清楚。因此，本研究擬選擇健康對(duì)照者、T2DM患者、DN患者和DPN患者作為研究對(duì)

4、象，觀察血清中TNF-α蛋白水平變化與單個(gè)核細(xì)胞TNF-α、MCP-1和IL-12mRNA的表達(dá)，分別探討其與DN和DPN之間發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，為臨床干預(yù)提供更充足的科學(xué)依據(jù)。
　　 方法:
　　 1、實(shí)驗(yàn)對(duì)象。
　　 本次試驗(yàn)設(shè)定為正常對(duì)照組(normal control,NC組)、2型糖尿病組（T2DM組）、糖尿病腎病組（DN組）、糖尿病周?chē)窠?jīng)病變組（DPN組）和糖尿病腎病合并糖尿病周?chē)窠?jīng)病變組(DN+DN

5、P組)。正常對(duì)照組(NC)為2012年8月-2012年12月到體檢中心健康體檢者，共16例（男5例，女11例，平均年齡為38.75±8.63歲）。DM組26例（男7例，女19例，平均年齡為52.15±14.16歲）。DN組20例（男14例，女6例，平均年齡為49.05±13.51歲）。DPN組14例（男8例，女6例，平均年齡為51.50±15.19歲）。DN+DNP組20例（男8例，女12例，平均年齡為62.75±10.69歲）。均為2

6、012年8月-2012年12月在邢臺(tái)市人民醫(yī)院同期住院患者。T2DM的診斷符合1999年世界衛(wèi)生組織(WHO)對(duì)糖尿病的分型標(biāo)準(zhǔn)，所有病例無(wú)心腦血管病變，無(wú)急性和慢性感染。DN組病例根據(jù)尿中微量白蛋白水平進(jìn)行確診。DPN的診斷符合《中國(guó)糖尿病防治指南》制定的DPN診斷標(biāo)準(zhǔn)，并且所有病歷排除其它原因?qū)е碌闹車(chē)窠?jīng)病變。
　　 2、實(shí)驗(yàn)方法。
　　 2.1、記錄對(duì)象的一般資料，晨起空腹抽取靜脈血2ml，分離血清于-20℃保存

7、備用。
　　 2.2、應(yīng)用ELISA方法在相同條件下測(cè)定各組血清樣品中TNF-α水平。
　　 2.3、用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)常規(guī)指標(biāo)空腹血糖(FBG)、尿微量白蛋白(mA1b)及尿總蛋白(UP)。
　　 2.4、抽取2ml全血，密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，提取總RNA，用real-timePCR檢測(cè)TNF-α、IL-12和MCP-1mRNA盼表達(dá)。
　　 3、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用Excel和SPSS13

8、.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，均數(shù)用t檢驗(yàn)、單一因素用直線相關(guān)分析，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1、血清中常規(guī)指標(biāo):空腹血糖(FBG)正常對(duì)照(NC)組為5.18±0.55mmol/L，糖尿病(DM)組為10.32±3.35 mmol/L，糖尿病腎病(DN)組為9.60±3.05 mmol/L，糖尿病周?chē)窠?jīng)病變(DPN)組為7.70±2.61mmol/L，糖尿病腎病合并

9、糖尿病周?chē)窠?jīng)病變(DN+DPN)組為14.70±3.89mmol/L。DM組、DN組、DPN組和DN+DPN組均顯著高于NC組，DN+DPN組顯著高于DM組。
　　 2、尿微量白蛋白（mA1b）:NC組為9.53±4.18mg/L，DM組為14.06±12.12mg/L，DN組為166.14±133.55 mg/L，DPN組為12.65±10.93 mg/L，DN+DPN組為462.70±308.36 mg/L。DN組和DN+

10、DPN組均顯著高于NC組。DN組和DN+DPN組均顯著高于DM組。
　　 3、尿總蛋白(UP):NC組為0.07±0.02g/24h，DM組為0.12±0.07g/24h，DN組為1.60±1.42g/24h，DPN組為0.35±0.88g/24h，DN+DPN組為0.28±0.23g/24h。DN組顯著高于NC組和DM組。
　　 4、血清中TNF-α的水平:NC組為8.15±3.00pg/ml，DM組為8.14±3.4

11、0pg/ml，DN組為7.35±1.63 pg/ml，DPN組為6.44±1.93 pg/ml，DN+DPN組為6.81±3.93 pg/ml。與NC組和DM組比較，DN組、DPN組和DN+DPN組均無(wú)顯著差異。
　　 5、單個(gè)核細(xì)胞TNF-α、MCP-1和IL-12mRNA表達(dá):Real-time PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，各實(shí)驗(yàn)組TNF-α mRNA的相對(duì)表達(dá)值NC組為0.89±0.22，DM組為0.63±0.29，DN組為1.4

12、3±0.60，DPN組為1.56±0.34，DN+DPN組為1.10±0.31。與正常對(duì)照組比較，DN組和DPN組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與DM組比較，DN組和DPN組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各實(shí)驗(yàn)組MCP-1mRNA的相對(duì)表達(dá)值NC組為1.10±0.21，DM組為4.34±2.09，DN組為11.52±5.53，DPN組為14.75±4.36，DN+DPN組為3.09±0.37。DN組和DPN組顯著高于NC組。DN組和DPN組顯著高于DM組。各實(shí)驗(yàn)組

13、IL-12mRNA的相對(duì)表達(dá)值NC組為1.32±0.65，DM組為0.28±0.26，DN組為3.31±2.18，DPN組為7.42±2.77，DN+DPN組為5.29±4.32。與正常對(duì)照組比較，DPN組和DN+DPN組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與糖尿病組(DM)比較，三組均有顯著差異。
　　 6、血清中TNF-α與常規(guī)指標(biāo)的相關(guān)分析:在DN組，血清TNF-α與FBG有相關(guān)性，并且呈正相關(guān)。
　　 結(jié)論:
　　 1、TN