食管癌中EphB1和EphrinB1表達及意義.pdf

1、食管癌是一種惡性程度極高的消化道腫瘤,位于全球腫瘤發(fā)病的第八位,腫瘤死亡的第六位。在世界范圍內(nèi),食管癌高發(fā)區(qū)包括:中國、南非、東非等。據(jù)最新報道,食管癌標化死亡率最高的地區(qū)仍然是河南省(32.95/10萬人)。對食管癌相關(guān)基因的深入研究,對于食管癌的早期診斷和開發(fā)有效的基因治療靶點及策略非常重要。
　　 Eph/Ephrin家族是目前已知最大的RTKs家族之一。Eph與ephrin介導(dǎo)的雙向信號傳導(dǎo)參與調(diào)節(jié)機體的許多正常生理機能

2、,內(nèi)穩(wěn)態(tài)及疾病和腫瘤的發(fā)生發(fā)展。目前,關(guān)于Eph/Ephrin家族在食管癌中的表達及作用報道甚少,因而,檢測分析了EphB1和EphrinB1在食管癌原發(fā)灶及其匹配的正常食管組織中表達水平及其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系和意義,進一步研究EphrinB1對食管癌細胞生長的影響。
　　 材料與方法:
　　 1、對象選擇、組織樣本的采集與患者臨床資料的收集
　　 選取2007年至2008年在河南省林州市腫瘤醫(yī)院就醫(yī)的食管癌患

3、者作為研究對象。采集92例手術(shù)后患者食管癌原發(fā)灶及其匹配的正常食管組織樣本,均經(jīng)病理學(xué)鑒定。收集病人基本資料和相關(guān)臨床病理資料,便于統(tǒng)計分析和研究。
　　 2、樣本中EphB1和EphrinB1 mRNA水平的測定
　　 采用實時熒光定量PCR技術(shù)測定食管癌組織中EphB1和EphrinB1 mRNA表達水平,以β-actin作為內(nèi)參基因。通過測定樣本中目的基因模板的Ct值即循環(huán)閾值來反映模板的含量。
　　 3、

4、樣本中EphB1和EphrinB1蛋白水平的測定
　　 通過western blot和免疫組織化學(xué)染色法測定食管癌癌組織中EphB1和EphrinB1蛋白表達水平。每一標本在200倍顯微鏡下觀察3個染色最強的視野,記數(shù)陽性細胞數(shù),并計算陽性細胞百分比,每個患者的食管癌組織中陽性細胞百分比與正常食管組織中陽性細胞百分比的比值作為食管癌蛋白表達水平指標。
　　 4、細胞轉(zhuǎn)染
　　 將EphrinB1的表達載體和pcD

5、NA3.1空載體分別轉(zhuǎn)入TE-12細胞。經(jīng)克隆后,通過western blot檢測EphrinB1的表達水平,并采用MTT比色法分析EphrinB1對TE-12細胞生長的影響。
　　 5、統(tǒng)計學(xué)分析
　　 運用SPSS12.0統(tǒng)計軟件,采用配對t檢驗比較mRNA表達水平。采用x2檢驗比較EphB1和EphrinB1 mRNA及蛋白表達水平與其臨床病理參數(shù)的關(guān)系。以α=0.05作為檢驗水準。
　　 結(jié)果：
　

6、　 1、食管癌中EphB1和EphrinB1 mRNA表達及其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系
　　 1.1 EphB1和EphrinB1在食管癌中mRNA的表達
　　 熒光定量PCR結(jié)果顯示,與匹配的正常食管組織相比,EphB1和EphrinB1分別在66.3％(61/92例)和64.2％(59/92例)食管癌組織表達上調(diào)。配對t檢驗顯示:食管癌組織與匹配正常食管組織中EphB1和EphrinB1 mRNA的表達水平均有統(tǒng)計學(xué)差

7、異。Pearson's相關(guān)分析表明,在食管癌組織中,EphB1和EphrinB1 mRNA表達呈高度正相關(guān)。
　　 1.2食管癌中EphB1和EphrinB1 mRNA表達水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系
　　 與無腫瘤家族史組相比,EphB1 mRNA水平在有腫瘤家族史組中高表達。EphB1在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者中的表達高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。在吸煙患者癌組織中,EphrinB1 mRNA表達水平高于非吸煙患者。與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者相比,E

8、phrinB1 mRNA在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者中高表達。EphrinB1 mRNA的表達與浸潤深度之間有顯著的相關(guān)性。
　　 2、食管癌中EphB1和EphrinB1蛋白表達及其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系
　　 2.1 Western blot分析與正常組織相比,EphB1和EphrinB1蛋白表達水平在腫瘤組織中呈現(xiàn)明顯的上調(diào)趨勢。
　　 2.2 EphB1和EphrinB1在食管癌中的蛋白表達EphB1和EphrinB1

9、蛋白表達水平分別在63.0％(58/92例)和60.9％(56/92例)食管癌組織中表達陽性,與real time PCR結(jié)果一致。
　　 2.3食管癌中EphB1和EphrinB1蛋白表達水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系EphB1蛋白在有腫瘤家族史組中的表達水平高于無腫瘤家族史組。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組食管癌組織中EphB1蛋白表達高于淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組。EphB1蛋白的表達與浸潤深度之間也具有顯著的相關(guān)性。
　　 吸煙人群EphrinB1

10、蛋白表達水平高于不吸煙人群。有腫瘤家族史組EphrinB1蛋白表達水平高于無腫瘤家族史組。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組EphrinB1蛋白表達水平高于淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組。浸潤越深,EphrinB1蛋白的表達水平越高。
　　 3、細胞轉(zhuǎn)染結(jié)果人食管癌細胞系在轉(zhuǎn)染EphrinB1后其增殖能力增強,且隨著EphrinB1表達水平的升高,其癌細胞增殖能力也越來越強。
　　 結(jié)論：
　　 1、與正常食管組織相比,食管癌組織中EphB1高表達。

11、EphB1 mRNA及蛋白表達與腫瘤家族史、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。
　　 2、與正常食管組織相比,食管癌組織中EphrinB1高表達。EphrinB1 mRNA和蛋白表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度密切相關(guān)。
　　 3、食管癌中EphB1和EphrinB1的表達水平呈正相關(guān),二者可能在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中產(chǎn)生協(xié)同作用,共同調(diào)節(jié)腫瘤血管生成、腫瘤細胞增殖,侵襲及轉(zhuǎn)移。
　　 4、EphrinB1的過表達增強了人食管癌細胞的