大鼠腦缺血再灌注后HSP20和Bcl-2的表達(dá)及丹紅注射液干預(yù)的影響.pdf

1、目的：
　　 檢測(cè)SD大鼠腦缺血再灌注中小熱休克蛋白20(heatshockproteinHSP20)、B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2(Bcelllymphoma/lewkmia-2，Bcl-2)在腦組織中的動(dòng)態(tài)變化，分析二者之間可能的關(guān)系，探討其在腦缺血再灌注中的作用。研究丹紅注射液對(duì)SD大鼠腦缺血再灌注中HSP20、Bcl-2的影響，闡明丹紅注射液可能的機(jī)制。
　　 方法：
　　 將250g-320g雄性健康SD大

2、鼠60只，隨機(jī)劃分成四組：正常對(duì)照組(normalgroup)(n=10)，假手術(shù)組(sham-operatedgroup)(n=10)和腦缺血再灌注組(I/Rgroup)(n=20)，丹紅注射液藥物干預(yù)組(n=20)。應(yīng)用Longa法建立SD大鼠大腦中動(dòng)脈缺血兩小時(shí)再灌注模型，其中IR組和藥物干預(yù)組又分為四個(gè)亞組，每個(gè)亞組5只動(dòng)物，分別是：6小時(shí)組、1天組、3天組、7天組。按Bederson1的5級(jí)評(píng)分法來(lái)評(píng)價(jià)手術(shù)后SD大鼠的神經(jīng)功能

3、缺損。應(yīng)用HE染色法觀察大鼠腦組織病理學(xué)變化情況；應(yīng)用免疫組織化學(xué)法來(lái)檢測(cè)Bcl-2、HSP20的陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)水平的動(dòng)態(tài)變化；應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法對(duì)標(biāo)本中HSP20mRNA的表達(dá)及擴(kuò)增倍數(shù)進(jìn)行測(cè)定。
　　 結(jié)果：
　　 1.HE染色：假手術(shù)組和正常對(duì)照組可見(jiàn)SD大鼠腦組織中神經(jīng)元結(jié)構(gòu)及形態(tài)正常、無(wú)間質(zhì)水腫、沒(méi)有明顯的梗塞灶。腦缺血再灌注組可見(jiàn)神經(jīng)元細(xì)胞壞死產(chǎn)生，隨著時(shí)間的推移病灶側(cè)神經(jīng)元壞死變性現(xiàn)象加重并伴有膠質(zhì)細(xì)

4、胞增生。而在藥物干預(yù)組和IR組各個(gè)相同時(shí)間點(diǎn)的亞組相比較，可以看出藥物干預(yù)組大鼠腦組織損傷程度明顯輕于缺血再灌注組。
　　 2.免疫組織化學(xué)結(jié)果：(1)HSP20在假手術(shù)組和正常組的個(gè)時(shí)間點(diǎn)偶見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞，兩組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。在腦缺血再灌注6h組中HSP20的表達(dá)有所升高，3d時(shí)到達(dá)高峰，之后呈逐漸下降趨勢(shì)，7d組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較3d組也有明顯減少，但仍高于假手術(shù)組和正常組。表達(dá)主要位于海馬區(qū)的神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞胞

5、漿中及血管內(nèi)皮細(xì)胞。IR組與假手術(shù)組及正常對(duì)照組比較HSP20的表達(dá)有差異，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；(2)Bcl-2在假手術(shù)組和正常組中偶可見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞，兩組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；Bcl-2在腦缺血再灌注6h組中表達(dá)開(kāi)始升高，并迅速升高在1d時(shí)達(dá)到高峰，之后隨著時(shí)間的推移逐漸下降，7d組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較3d組也有明顯減少，但依然比假手術(shù)組及正常組高；Bcl-2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在IR組與假手術(shù)組的比較中有差異，且其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

6、意義(P<0.01)；(3)丹紅藥物干預(yù)組中，HSP20的表達(dá)趨勢(shì)與IR組基本相同，但陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯高于IR組，且其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。丹紅藥物干預(yù)組與腦缺血再灌注組中Bcl-2的表達(dá)趨勢(shì)基本相同，但陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)卻明顯高于IR組，并且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 3.RT-PCR檢測(cè)結(jié)果：在腦缺血再灌注組中HSP20mRNA在6h時(shí)開(kāi)始升高，3d時(shí)達(dá)到最高，之后逐漸降低但7d組仍高于正常對(duì)照組及假手術(shù)組，