環(huán)氧合酶在卵巢癌細胞中的表達及其抑制劑對細胞的增殖抑制.pdf

1、研究背景和目的： 卵巢惡性腫瘤是婦科常見腫瘤。由于卵巢癌早期不易發(fā)現(xiàn)，患者就診時往往己處于病變晚期或有遠處轉(zhuǎn)移。80％以上的卵巢惡性腫瘤為上皮性癌，來源于卵巢上皮。卵巢癌發(fā)病機制并未完全清楚，但炎癥反應是其發(fā)生的重要因素之一。盆腔炎和子宮內(nèi)膜異位等慢性炎癥的刺激均可增加卵巢癌的發(fā)病風險；排卵和排卵后卵巢上皮的修復都有部分炎癥介質(zhì)的參與，有可能引起上皮細胞的異常增生。有研究報道口服避孕藥或妊娠等通過減少排卵量而降低卵巢癌的發(fā)病風險

2、；也有報道保留卵巢的子宮切除術(shù)和輸卵管切除術(shù)因可減少局部炎癥反應而降低卵巢癌的發(fā)病風險。 環(huán)氧合酶(Cyclooxygenase，COX)是一類與前列腺素合成有關(guān)的酶，是花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素前體-前列腺素H<,2>的限速酶，而前列腺素是一類重要的炎癥介質(zhì)。COX-1和COX-2是COX的一對同功酶，也是目前COX家族中研究最多的兩種酶。一度認COX-2催化合成的前列腺素參與炎癥反應，而COX-1不直接參與炎癥，但近年大量研究

3、報道COX-1不僅參與炎癥，并有加重炎癥的作用。 COX亞型在卵巢癌中的表達及作用仍存在一定爭議。有研究發(fā)現(xiàn)COX-2的表達可促進卵巢癌細胞增殖、血管生成、抑制凋亡和轉(zhuǎn)移；大量的研究還發(fā)現(xiàn)COX-2與卵巢癌鉑類化療藥物耐藥有關(guān)。而COX-1長期被人們認為是一種結(jié)構(gòu)型酶，其作用主要是在多數(shù)組織微量恒定表達，維持機體正常生理功能，但近年有研究報道COX-1在卵巢癌中表達上調(diào)且可促進腫瘤血管生成。由于COX-2易受機體內(nèi)外環(huán)境因素的刺

4、激誘導性表達，有研究發(fā)現(xiàn)在沒有接受過細胞減滅治療的卵巢癌患者表現(xiàn)為COX-1表達上調(diào)而不是COX-2，因此COX-1可能也是卵巢癌的一種腫瘤標志物。 COX的表達可促進腫瘤細胞增殖、血管生成和抑制凋亡等，抑制這些調(diào)節(jié)途徑有望達到治療療效。COX抑制劑是一類廣泛應用于臨床的藥物，其最初用于抗炎癥治療，如阿斯匹林，布洛芬等，是一類經(jīng)典的非甾體類消炎藥。研究發(fā)現(xiàn)非甾體類消炎藥(non-steroidal anti-inflammatory d

5、rugs，NSAIDs)可降低某些腫瘤的發(fā)病風險，如規(guī)范使用NSAIDs 10-15年可降低結(jié)直腸癌發(fā)病風險40％-50％。以COX調(diào)節(jié)途徑為作用靶點的藥物可能開辟腫瘤治療的新途徑。 本課題以卵巢上皮性癌細胞株SKOV-3和OVCAR-3為代表，研究COX-1和COX-2在卵巢癌細胞中的表達情況以及使用特異性COX-1抑制劑SC-560和特異性COX-2抑制劑NS-398對卵巢癌細胞生物學特性的影響。 方法： 1

6、．Western blot法檢測COX-1和COX-2在卵巢癌細胞SKOV-3和OVCAR-3中的表達； 2．MTT法檢測不同濃度的SC-560和NS-398處理卵巢癌細胞后對細胞增殖的影響； 3．流式細胞儀檢測SC-560和NS-398處理卵巢癌細胞后對細胞增殖周期的影響； 4．ELISA檢測SC-560和NS-398處理卵巢癌細胞后對細胞PGE<,2>合成的影響； 結(jié)果： 1．COX-1和CO

7、X-2在卵巢癌細胞中的表達COX-1在SKOV-3和OVCAR-3兩株細胞均呈陽性表達，而COX-2只在OVCAR-3細胞中呈陽性表達。 2．不同濃度的SC-560和NS-398對卵巢癌細胞增殖的影響SC-560和NS-398對卵巢癌細胞生長均有抑制作用。其中SC-560對OVCAR-3細胞的生長抑制強于SKOV-3細胞。50 μmol/L的SC-560在24 h即可對OVCAR-3細胞的生長產(chǎn)生抑制作用，而對SKOV-3細胞的

8、生長抑制作用表現(xiàn)在48 h后，所需藥物濃度也較OVCAR-3細胞大，50μmol/L對SKOV-3細胞無增殖抑制作用；作用時間24 h和48 h，NS-398對OVCAR-3細胞無生長抑制，72 h時可表現(xiàn)明顯細胞增殖抑制，而對SKOV-3細胞的生長抑制起效于48 h，所需藥物濃度較大，50 μmol/L對細胞增殖無抑制。在相同濃度作用時間相同時SC-560對細胞的生長抑制作用強于NS-398。 3．不同濃度的SC-560和NS

9、-398對卵巢癌細胞增殖周期的影響SC-560和NS-398對SKOV-3和OVCAR-3細胞增殖周期無顯著影響(P>0.05)，但能促進腫瘤細胞凋亡。 4．SC-560和NS-398對卵巢癌細胞PGE<,2>合成的影響SC-560和NS-398均能減少卵巢癌細胞PGE<,2>的合成。 結(jié)論： 1.COX-1在兩株卵巢上皮性癌細胞中均有陽性表達，而COX-2僅在OVCAR-3細胞中呈陽性表達。提示二者可能有不同的

10、表達調(diào)節(jié)途徑。COX-1和COX-2與卵巢癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系有待進一步研究。 2．特異性COX-1抑制劑SC-560和特異性的COX-2抑制劑NS-398對卵巢癌細胞生長均有抑制作用，但在相同濃度、作用時間相同時SC-560對細胞的生長抑制作用強于NS-398。 SC-560和NS-398對細胞生長周期無明顯影響，但能加速細胞的凋亡，提示SC-560和NS-398可能通過調(diào)節(jié)凋亡途徑抑制腫瘤細胞的生長。 3．SC-560和