絲素蛋白多孔支架在大鼠脊髓血管化的實驗研究.pdf

1、目的:
　　 觀察絲素蛋白多孔支架（poroussilkfibroinscaffolds，PSFSs）在大鼠脊髓損傷（spinalcordinjury,SCI）部位的血管化，探討組織工程方法修復(fù)SCI的作用機制，為絲素蛋白（silkfibroin，SF）用于組織工程修復(fù)中樞神經(jīng)系統(tǒng)(centralnervoussystem，CNS)損傷提供實驗基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 (1)植入物的制備制備具有相近結(jié)

2、構(gòu)參數(shù)（孔徑、孔隙率、孔隙間連通率）的PSFSs及聚乙烯醇(polyvinylalcohol，PVA)海綿，進(jìn)行掃描電鏡觀察；(2)動物模型的建立、實驗分組及材料植入選取28只清潔級雌性SpragueDawley(S-D)大鼠（體重250～300g），隨機分為A、B兩組（A為實驗組，n=16;B為對照組，n=12）；采用手術(shù)方法建立T10平面脊髓左側(cè)半橫斷損傷模型，A組植入PSFSs，B組植入PVA;術(shù)后單籠飼養(yǎng)、預(yù)防感染；(3)檢測指

3、標(biāo)分別于術(shù)后4d、7d、10d、14d、21d、28d共6個時間點，每組各取2只大鼠灌注取材觀察標(biāo)本大體形態(tài)；行組織學(xué)、免疫組織化學(xué)(CD34)檢測，觀察局部炎癥反應(yīng)、材料變化情況及材料內(nèi)微血管生成情況；并采用透射電鏡觀察A組術(shù)后14d、28d時微血管超微結(jié)構(gòu)。
　　 結(jié)果:
　　 (1)PSFSs的初始形狀為圓柱體，與大鼠脊髓外形相似，將其切割成適合的半圓形；掃描電鏡圖像示PSFSs具有合理的孔徑及孔隙率，并具有較高的

4、孔隙間連通率；PVA的結(jié)構(gòu)參數(shù)與PSFSs相近；(2)成功地建立了大鼠半橫斷SCI模型，并總結(jié)出一套行之有效的術(shù)后護(hù)理方法；大鼠術(shù)后存活良好，并發(fā)癥少，無樣本丟失；(3)標(biāo)本大體形態(tài)觀察以材料為中心取長約lOmm脊髓組織，見材料部位呈淡黃色、與周圍脊髓組織融合良好，材料表面有少量結(jié)締組織；(4)HE染色觀察A組的炎癥反應(yīng)較B組輕、消退速度快，PSFSs降解較明顯；植入術(shù)后7dPSFSs內(nèi)可見管腔樣結(jié)構(gòu)形成、此時PVA內(nèi)尚無管腔樣結(jié)構(gòu)形成

5、；隨時間推移，材料內(nèi)管腔樣結(jié)構(gòu)增多；(5)免疫組織化學(xué)觀察通過CD34染色觀察材料內(nèi)微血管生成情況、并計數(shù)微血管密度（microvesseldensity,MVD），A組在術(shù)后7d、10d、14d、21d、28d分別為1.4、3.6、10.6、8.6、8.8，對照組分別為0、2.2、4.8、4.6、4.0，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；A組在術(shù)后7d即可觀察到材料內(nèi)有微血管形成，14d時達(dá)到峰值，隨后有所下降并穩(wěn)定于一定水平；B組

6、7d時尚無微血管形成，14d時微血管數(shù)量較多，也呈現(xiàn)有所下降并趨于穩(wěn)定的變化規(guī)律；(6)透射電鏡觀察術(shù)后14d，PSFSs內(nèi)可見毛細(xì)血管形成，能看到完整的內(nèi)皮細(xì)胞、呈扁平狀，管腔中有紅細(xì)胞，周細(xì)胞位于內(nèi)皮細(xì)胞基底膜的外側(cè)，環(huán)繞血管管腔；術(shù)后28d，材料內(nèi)血管化進(jìn)一步充分和完全，血管結(jié)構(gòu)完整，成為有灌注的功能性血管。
　　 結(jié)論:
　　 PSFSs可以在大鼠SCI部位血管化，這是細(xì)胞存活和神經(jīng)軸突再生的前提。SF有望成為組