新西蘭兔脊柱結(jié)核模型的構(gòu)建及評價相關(guān)實驗研究.pdf

1、目的：在新西蘭白兔第4腰椎上終板鉆孔、種植人型結(jié)核桿菌 H37Rv標(biāo)準(zhǔn)菌株，構(gòu)建新西蘭兔脊柱結(jié)核模型，為脊柱結(jié)核的臨床與基礎(chǔ)研究提供動物模型；并通過影像學(xué)、病理學(xué)、細(xì)菌學(xué)來評價，探討提供新西蘭兔脊柱結(jié)核模型成功率的相關(guān)方法。
　　方法：42只新西蘭兔分為三組，實驗組20只，對照組20只，空白組2只。弗氏完全佐劑注射至新西蘭兔頸根部背側(cè)皮內(nèi)，1個月后在已致敏的新西蘭兔的腰4椎體上方近椎間盤處鉆孔，以明膠海綿填充，實驗組內(nèi)注入濃度為5

2、mg/ml的結(jié)核桿菌混懸液0.1ml（菌量為1×107 CFU/ml）；對照組內(nèi)注入液體培養(yǎng)基與生理鹽水混合液0.1ml?？瞻捉M不做任何處理。術(shù)后觀察實驗兔一般情況，并于術(shù)后4w、8w通過影像學(xué)、組織病理學(xué)、細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)等方法評價來證實新西蘭兔脊柱結(jié)核模型成功率。
　　結(jié)果：術(shù)中除實驗組內(nèi)1只實驗兔因麻醉時空氣栓塞致死外，其余37只實驗兔手術(shù)順利。實驗組內(nèi)4只出現(xiàn)消瘦、納差等癥狀；1只實驗兔于1個月后進食不佳，五天后死亡；1只實驗兔

3、于術(shù)后49天死亡，解剖發(fā)現(xiàn)胸腔內(nèi)有大量膿液，肺臟表面彌散大小不等結(jié)節(jié)。其余實驗兔活動好，精神及進食好，術(shù)后2月15只實驗兔存活，存活率為88.2％(15/17)。對照組內(nèi)20只實驗兔有1只術(shù)后麻醉未恢復(fù)當(dāng)日死亡。1只兔術(shù)后進食、飲水不佳于術(shù)后第13天死亡。其余18只兔術(shù)后平穩(wěn)，進食良好，體重?zé)o明顯變化。術(shù)后2月18只實驗兔存活，存活率為94.7％(18/19)?？瞻捉M內(nèi)實驗兔活動好，精神及進食好，2月2只實驗兔存活，存活率為100％(2

4、/2)。
　　實驗組內(nèi)實驗兔在腰椎感染 H37 Rv標(biāo)準(zhǔn)結(jié)核桿菌后，兔椎體骨破壞于術(shù)后4w即被發(fā)現(xiàn)。術(shù)后4w X線觀察陽性兔8只（8/17），8w陽性兔10只（10/15）。術(shù)后4w重建 CT觀察陽性兔15只（15/17），8w陽性兔為15只（15/15）。術(shù)后4wMRI觀察陽性兔為13只（13/17），8w陽性兔15只（15/15）。對照組內(nèi)所有實驗兔術(shù)后8w內(nèi)未發(fā)現(xiàn)椎體骨破壞。術(shù)后8w在麻醉下解剖實驗組內(nèi)實驗兔，見所有實驗兔傷

5、口愈合良好，無皮膚竇道形成。12只實驗兔腰大肌無膿腫，剝離椎前肌與椎體粘連后，未見椎體上端孔洞，可見椎間盤前方纖維環(huán)顏色發(fā)暗、凹陷，椎體骨質(zhì)改變，椎間隙略變窄（正常椎間盤纖維環(huán)為瓷白色，膨隆感）。其中3只腰大肌有0.5cm～1.0cm膿腫，為黃白色，膿腫內(nèi)有砂礫樣感。椎旁軟組織有肉芽組織生成。見2只實驗兔 L3-4椎間盤與上下終板粗大，凸向前方，明顯骨質(zhì)破壞。取病變椎體、肉芽組織和膿腫行病理檢查，HE染色發(fā)現(xiàn)有死骨、大量炎癥反應(yīng)，淋巴細(xì)

6、胞浸潤、類上皮樣細(xì)胞或壞死灶等形成，但無多核巨細(xì)胞反應(yīng)和典型的結(jié)核結(jié)節(jié)形成。實驗組內(nèi)兔椎旁肉芽組織勻漿后通過自制羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng)，6w內(nèi)有73.3％結(jié)核分枝桿菌生長。通過影像學(xué)、大體觀察、病理學(xué)和細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)，綜合評價新西蘭兔脊柱結(jié)核模型成功率為88.2％（15/17）。
　　結(jié)論：新西蘭兔經(jīng)過弗氏完全佐劑致敏，在兔脊柱椎體局部種植適當(dāng)劑量的H37Rv結(jié)核標(biāo)準(zhǔn)菌株，通過影像學(xué)、組織病理、細(xì)菌學(xué)等檢查證實，能夠構(gòu)建出與人類脊柱結(jié)核的病理