骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)重度脂肪變供肝肝移植術(shù)后肝功能影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文從以下幾部分進(jìn)行論述：
　　第一章:大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)與鑒定
　　目的:體外培養(yǎng)活性好、純度高的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。
　　方法:采用密度梯度離心法分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，采用流式細(xì)胞儀鑒定其表面抗原的表達(dá)情況，用成軟骨試劑、成脂試劑誘導(dǎo)BMSCs分化成軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞。
　　結(jié)果:獲得細(xì)胞具有明顯的貼壁性，其細(xì)胞表面高表達(dá)CD44、CD90、CD29抗原分子，低表達(dá)CD45、CD34、CD11

2、b抗原分子。成軟骨誘導(dǎo)分化3周，BMSCs即可分化成軟骨細(xì)胞，成脂誘導(dǎo)分化2周，即可分化成脂肪細(xì)胞。
　　結(jié)論:密度梯度離心法可以獲得活性好、純度高、具有多向分化潛能的BMSCs。
　　第二章:大鼠脂肪變供肝肝移植模型的建立
　　目的:建立脂肪變供肝肝移植模型。
　　方法:通過高脂飲食8周建立脂肪肝模型，采用在kamada肝移植模型的基礎(chǔ)上，改進(jìn)手術(shù)方法，預(yù)實(shí)驗(yàn)50對(duì)，正式實(shí)驗(yàn)40對(duì)，觀察手術(shù)成功率，并分別于術(shù)前

3、1天、術(shù)后1天、術(shù)后3天、術(shù)后5天、術(shù)后7天、術(shù)后12天分別抽血，觀察谷草轉(zhuǎn)氨酶、白蛋白等指標(biāo)的變化規(guī)律。
　　結(jié)果:通過預(yù)實(shí)驗(yàn)獲得較高的模型成功率，正式實(shí)驗(yàn)40對(duì)大鼠肝移植手術(shù)成功率為90％，術(shù)后谷草轉(zhuǎn)氨酶、白蛋白短暫升高后逐漸恢復(fù)。
　　結(jié)論:成功建立了穩(wěn)定的大鼠脂肪變供肝肝移植模型。
　　第三章:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在移植肝中的定居
　　目的:探討B(tài)MSCs在移植肝中的定居情況
　　方法:分別采用DAPI

4、、慢病毒行骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)記，選用標(biāo)記速率快、效果好的標(biāo)記物標(biāo)記后，于肝移植過程中，門靜脈套管前行BMSCs輸注，分別于術(shù)后7d、12d，取病理切片熒光顯微鏡下觀察其定居情況
　　結(jié)果:濃度為1.5ul/L的DAPI與細(xì)胞共培養(yǎng)標(biāo)記12h后，在熒光倒置顯微鏡下觀察其細(xì)胞藍(lán)光標(biāo)記率達(dá)95％左右。含有綠色熒光蛋白基因的慢病毒與干細(xì)胞共培養(yǎng)12h后，BMSCs的熒光表達(dá)很低，繼續(xù)感染1天后其熒光標(biāo)記率才達(dá)到40％左右。采用DAPI標(biāo)記

5、BMSCs輸注移植肝后，7d、12d都可觀察到標(biāo)記的BMSCs，但熒光強(qiáng)度逐漸減弱。
　　結(jié)論:BMSCs能夠成功定居在移植的肝臟中
　　第四章:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)重度脂肪變供肝肝移植術(shù)后肝功能的影響
　　目的:探討B(tài)MSCs能否對(duì)重度脂肪變供肝肝移植術(shù)后肝功能起到保護(hù)作用
　　方法:實(shí)驗(yàn)分干細(xì)胞組和對(duì)照組兩組，每組行肝移植30只，對(duì)照組于門靜脈套管前輸注平衡鹽溶液1ml，干細(xì)胞組于門靜脈套管前輸注BMSCs1m

6、l，分別于術(shù)后1d、3d、5d、7d處死5只，檢測(cè)肝功能AST、ALT、ALB、TB指標(biāo)，每組剩余10只觀察術(shù)后的大鼠的生存情況。
　　結(jié)果:對(duì)照組組和干細(xì)胞組術(shù)后1d、3d、5d、7d的肝功能指標(biāo)的比較如下:AST指標(biāo)分別為1040±61.1、1196.75±104.4、1221.5±96.2、1330.25±55.1和1115±63.3、970±64.2、1069±67.8、1150.25±102.5U/L。其中3d、5d、7

7、d數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(P＜0.05)。1d數(shù)據(jù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(P＞0.05)ALT指標(biāo)分別為911.75±61.9、1044.25±63.4、1191±190.4、1285.25±191和1096.25±97.7、1267.25±162.9、959±99.5、1051.5±110.5U/L。其中1d、3d、5d、7d數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。TB指標(biāo)分別為4.05±1.34、7.53±1.8、8.73±0.26、

8、9.42±0.33和5.48±0.33、6.53±0.21、7.13±0.26、7.78±0.34U/L。其中1d、3d數(shù)據(jù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，5d、7d數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。ALB指標(biāo)分別為21.75±1.7、20.75±1.7、20.5±2.1、15.75±2.2和22±1.8、21.5±0.58、21±0.71、19.5±0.74U/L。其中1d、3d、5d數(shù)據(jù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，7d