單核細(xì)胞源性微囊泡產(chǎn)生機(jī)制及其對腎小球系膜細(xì)胞的影響.pdf

1、目的:
　　應(yīng)用細(xì)胞模型研究高糖環(huán)境下單核細(xì)胞產(chǎn)生微囊泡的機(jī)制及其對人腎小球系膜細(xì)胞的影響。
　　方法:
　　以體外培養(yǎng)單核細(xì)胞（THP-1）、人腎小球系膜細(xì)胞(HRMC)為研究模型，高糖處理選取的葡萄糖濃度為30mM。
　　1.以MitoSox為探針，采用流式細(xì)胞儀檢測高糖刺激THP-1細(xì)胞2h、4h、12h、24h、48h，線粒體內(nèi)超氧化物含量。
　　2.采用ELISA法檢測高糖刺激THP-1細(xì)胞24h

2、產(chǎn)生MV及P38抑制劑的干預(yù)作用。
　　3.采用組織因子(TF)活性底物發(fā)色法檢測THP-1細(xì)胞源性MV的促凝血活性(PCA)。
　　4.分離THP-1細(xì)胞源性MV，處理HRMC細(xì)胞，應(yīng)用Western Blot法檢測HRMC細(xì)胞24h、48h、72h后VEGF、HIF1a蛋白表達(dá)的變化。
　　結(jié)果:
　　1.流式細(xì)胞儀檢測示:30mM葡萄糖刺激THP-1細(xì)胞后，線粒體超氧化物水平在2h、4h、12h、24h、4

3、8h分別為0h的2.0、2.1、2.5、2.8、3.0倍(P＜0.01)，隨時間的延長呈逐步遞增趨勢，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。
　　2.ELISA結(jié)果示:與對照組相比，高糖組MV產(chǎn)生顯著增加，約為對照組的4.6倍(P＜0.01)。與高糖組相比，高糖+P38抑制劑組MV產(chǎn)生顯著減少，大約減少了66％(P＜0.01)，而對照組與對照+P38抑制劑組MV無明顯差異(P＞0.05)。
　　3.TF活性底物發(fā)色法結(jié)果示:與對

4、照組相比，高糖組TF表達(dá)顯著增加，約為對照組的5.1倍(P＜0.01)。與高糖組相比，高糖+P38抑制劑組TF表達(dá)顯著減少，大約減少了78％(P＜0.01)，而對照組與對照+P38抑制劑組TF表達(dá)無明顯差異。
　　4.Western Blot結(jié)果顯示:隨MV處理時間延長，HRMC細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)呈上升趨勢，24h時無明顯變化，48h、72h時VEGF蛋白相對表達(dá)明顯增多(P＜0.01);隨MV處理時間延長，HRMC細(xì)胞HIF1