鈣庫調(diào)控鈣離子通道特異分子的篩選及其相關特性的研究.pdf

1、鈣庫調(diào)控鈣離子通道(store-operated calcium channel,SOC)是一種在多種細胞中存在的鈣離子通道。其基本的門控機制是當胞內(nèi)鈣庫逐漸排空時,位于鈣庫膜上的信號分子STIM1(stromal interaction moleculel)將會聚集并與細胞膜上的SOC通道蛋白Orail相互結(jié)合,改變其構(gòu)象并打開通道。SOC通道可以調(diào)控許多生理功能,比如可以調(diào)控一些基因的轉(zhuǎn)錄、胞內(nèi)某些酶的活性以及細胞的胞吐作用等等。同

2、時,SOC通道功能的異常也與一些疾病相關,比如重癥聯(lián)合免疫缺陷綜合癥等。而目前由于已知的SOC通道的拮抗劑和激動劑數(shù)量有限,且基本上都沒有特異性,使得人們對SOC通道的深入了解受到了阻礙。
　　 本論文針對這一點利用果蠅S2細胞,應用胞內(nèi)熒光強度檢測的實驗方法構(gòu)建了SOC通道特異分子的篩選模型,并利用該模型對部分從中草藥中提取的小分子化合物進行篩選。經(jīng)反復驗證,最終得到了一個有拮抗效果的小分子科羅索酸,并初步研究了科羅索酸對SO

3、C的拮抗機制。
　　 1.SOC通道特異分子篩選模型的構(gòu)建
　　 選擇果蠅S2細胞作為SOC通道特異分子篩選的細胞模型。經(jīng)摸索,發(fā)現(xiàn)25℃、無CO2的培養(yǎng)條件是較適宜S2細胞生長的條件。在該培養(yǎng)條件下,應用SOC通道激動劑TG、胞內(nèi)鈣探針Fluo-4AM以及FlexStation細胞內(nèi)鈣檢測的技術,構(gòu)建了SOC通道特異分子篩選的基本細胞模型,并利用該模型對三種已知的鈣通道拮抗劑Gd3+、SKF-96365和2APB進行測

4、試。結(jié)果顯示,基本模型能夠很好地檢測出這三種拮抗劑對SOC通道的作用特性及效果,表明基本細胞模型是可靠、穩(wěn)定的;為后續(xù)的藥物篩選實驗打下了基礎。
　　 2.天然提取化合物的篩選及活性化合物的作用機理初探
　　 應用所構(gòu)建的SOC通道特異分子的篩選模型,對本所從中草藥中所分離出的小分子化合物進行篩選。經(jīng)驗證,最終得到了一個對SOC通道有拮抗效果的小分子化合物科羅索酸。之后,我們對科羅索酸的拮抗機理進行了探索,發(fā)現(xiàn)科羅索酸能