通塞脈微丸干預(yù)缺血性中風(fēng)大鼠的代謝組學(xué)研究.pdf

1、缺血性中風(fēng)屬于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)腦血管疾病的范疇，是當(dāng)今威脅人類健康的三大疾病之一，具有患病率高、發(fā)病率高、致殘率高、復(fù)發(fā)率高的特點(diǎn)。缺血性中風(fēng)病因病機(jī)復(fù)雜，而中藥治療作用是“多成分、多靶點(diǎn)”的整體藥效表現(xiàn)，但往往缺乏有效的研究方法加以證明。代謝組學(xué)作為一種系統(tǒng)生物學(xué)方法，是一種有效的整體研究的新方法，本課題以通塞脈微丸為對(duì)象，從整體觀研究通塞脈微丸治療缺血性中風(fēng)的作用。
　　 本課題采用電凝法復(fù)制大鼠缺血性中風(fēng)模型，對(duì)與缺血性中風(fēng)相應(yīng)的

2、體液和組織（血液、腦組織和腦脊液）進(jìn)行代謝組學(xué)研究，并對(duì)腦組織中的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)進(jìn)行研究，主要研究?jī)?nèi)容包括四方面：
　　 一、通塞脈微丸干預(yù)缺血性中風(fēng)大鼠的腦組織代謝組學(xué)研究
　　 將大鼠分為模型組、假手術(shù)組、通塞脈組和陽(yáng)性藥組，每組8只。通塞脈組按生藥量13.2g·kg-1·d-1灌胃給藥，陽(yáng)性藥組給予尼莫地平32mg·kg-1·d-1，模型組、假手術(shù)組灌服等體積蒸餾水，連續(xù)給藥7天。第7天給藥后1小時(shí)斷頭取腦。運(yùn)用氣

3、相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)技術(shù)，對(duì)各組腦組織中內(nèi)源性代謝物進(jìn)行測(cè)定，采用偏最小二乘法-判別分析(PLS-DA)對(duì)多變量數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，t檢驗(yàn)方法進(jìn)行顯著性統(tǒng)計(jì)分析。
　　 模式識(shí)別中模型組大鼠能較好地與其他三組分開(kāi)。與假手術(shù)組大鼠相比，模型組大鼠腦組織中的丙氨酸、絲氨酸、甲硫氨酸、檸檬酸、組氨酸、花生四烯酸(AA)和二十二碳六烯酸(DHA)的含量升高，而核糖、6-磷酸葡萄糖和肌苷的含量下降，提示腦組織中這10種內(nèi)源性物質(zhì)為腦缺血的

4、潛在生物標(biāo)志物。這些內(nèi)源性物質(zhì)在通塞脈組大鼠體內(nèi)得到了不同程度的恢復(fù)，而花生四烯酸和二十二碳六烯酸在通塞脈組與模型組大鼠體內(nèi)的含量有明顯差異，說(shuō)明通塞脈微丸對(duì)花生四烯酸和二十二碳六烯酸這兩種潛在生物標(biāo)志物有明顯的調(diào)節(jié)作用。所以通塞脈微丸可以使造模后大鼠的體內(nèi)代謝物含量有不同程度的恢復(fù)，提示其治療作用可能與相關(guān)代謝通路的調(diào)節(jié)有關(guān)。
　　 二、通塞脈微丸干預(yù)缺血性中風(fēng)大鼠的血漿代謝組學(xué)研究
　　 將大鼠分為模型組、假手術(shù)組、

5、通塞脈組和陽(yáng)性藥組，每組8只。通塞脈組按生藥量13.2g·kg-1·d-1灌胃給藥，陽(yáng)性藥組給予尼莫地平32mg·kg-1·d-1，模型組、假手術(shù)組灌服等體積蒸餾水，連續(xù)給藥7天。采集模型組、假手術(shù)組血漿和通塞脈組、陽(yáng)性藥組大鼠給藥第1、3、7天的血漿，并對(duì)其進(jìn)行分析。
　　 與假手術(shù)組大鼠相比，模型組大鼠血漿中的丙酮酸、?；撬?、羥脯氨酸的含量明顯升高，而乳酸、甘油酸、氨基丙二酸、果糖、色氨酸和亮氨酸顯著下降，提示血漿中這9種內(nèi)

6、源性物質(zhì)為腦缺血的潛在生物標(biāo)志物。通塞脈微丸給藥使得上述內(nèi)源性物質(zhì)（除?；撬幔┑玫搅瞬煌潭鹊幕謴?fù)。結(jié)果說(shuō)明通塞脈微丸可以使造模后大鼠血漿中異常變化的代謝物水平有不同程度的恢復(fù)。
　　 三、通塞脈微丸干預(yù)缺血性中風(fēng)大鼠的腦脊液代謝組學(xué)研究
　　 將大鼠分為模型組、假手術(shù)組、通塞脈組和陽(yáng)性藥組，每組8只。通塞脈組按生藥量13.2g·kg-1·d-1灌胃給藥，陽(yáng)性藥組給予尼莫地平32mg·kg-1·d-1，模型組、假手術(shù)組灌

7、服等體積蒸餾水，連續(xù)給藥7天。第7天給藥后1小時(shí)取腦脊液。
　　 但與腦組織和血漿不同的是，不同組大鼠腦脊液的內(nèi)源性物質(zhì)在種類和含量上沒(méi)太大區(qū)別，通過(guò)對(duì)模型組和假手術(shù)組的比較發(fā)現(xiàn)1個(gè)有差異的化合物為木糖，通塞脈微丸干預(yù)后向假手術(shù)趨近。通塞脈組和模型組腦脊液的總離子圖略有差異，但也不大，通過(guò)t檢驗(yàn)，只鑒定出吡喃葡萄糖這一個(gè)差異化合物。因此，造模后和給予通塞脈微丸后大鼠腦脊液的成分都沒(méi)有太大變化。
　　 四、通塞脈微丸對(duì)缺血

8、性中風(fēng)大鼠腦組織中的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響
　　 將大鼠隨機(jī)分為3組，每組6只，分別為假手術(shù)組（蒸餾水）、模型組（蒸餾水）、通塞脈組(生藥量13.2g·kg-1·d-1)，上述各組藥物均用蒸餾水配置成所需濃度。給藥體積為：每100g給藥1mL。另外假手術(shù)組找到大腦中動(dòng)脈而不電凝，每天給藥2次，連續(xù)3天。第3天給藥后1小時(shí)斷頭取腦。應(yīng)用HPLC-ECD方法對(duì)缺血性中風(fēng)大鼠腦組織中三種單胺類神經(jīng)遞質(zhì)（NE、DA和5-HT）進(jìn)行檢測(cè)。<