共軛亞油酸對(duì)仔豬脂肪細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、共軛亞油酸(Conjugated linoleic acid，CLA)具有抑制動(dòng)物脂肪沉積的作用，但其作用機(jī)制并不完全清楚。本論文結(jié)合動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究手段與分子生物學(xué)技術(shù)，從個(gè)體和分子水平系統(tǒng)探討了CLA通過(guò)誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞凋亡的方式來(lái)抑制豬的脂肪沉積，揭示其可能存在的作用機(jī)制。
　　試驗(yàn)選用36頭長(zhǎng)白×榮昌仔豬，體重13.91±1.53 kg，隨機(jī)分為3個(gè)處理組，每個(gè)處理組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)4頭仔豬，分別飼喂含0％（對(duì)照組）、1％和2

2、％ CLA的日糧，試驗(yàn)持續(xù)30天。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，仔豬空腹12h后稱重，隨后從每個(gè)重復(fù)中選取2頭體重適中的仔豬進(jìn)行靜脈采血，分離得血清，用以血液生化指標(biāo)的測(cè)定。然后，仔豬放血屠宰，測(cè)量背部皮下脂肪厚度，剝離背部脂肪組織和腹部脂肪組織進(jìn)行稱重。分別取大塊背最長(zhǎng)肌和半腱肌，用以肌內(nèi)脂肪含量測(cè)定。此外，每頭仔豬分別取三份脂肪組織，分別用于形態(tài)學(xué)觀察， Caspase-3、-8、-9等凋亡因子酶活分析，以及凋亡相關(guān)因子的基因和蛋白表達(dá)水平檢測(cè)。主要

3、試驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1.CLA顯著降低了仔豬日均采食量（P＜0.05），而對(duì)料重比影響不顯著(P＞0.05)。1％和2％ CLA組分別使仔豬日均增重下降13.13％(P＜0.05)和7.95％(P＞0.05)。
　　2.日糧添加CLA顯著減少了仔豬的背部脂肪沉積量（P＜0.05）。并且隨著CLA添加水平的提高，背膘厚降低。利用生化分析儀檢測(cè)血清，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CLA對(duì)仔豬血清中的葡萄糖、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇和高密度脂蛋白膽

4、固醇等生化指標(biāo)影響不明顯(P＞0.05)，但顯著降低了總膽固醇含量（P＜0.05）。
　　3.通過(guò)對(duì)脂肪組織切片的免疫熒光染色觀察發(fā)現(xiàn)CLA處理組仔豬的背部脂肪細(xì)胞表現(xiàn)出明顯的凋亡跡象，包括染色質(zhì)聚集、核濃縮、DNA斷裂等凋亡特征，尤其是2％ CLA組脂肪細(xì)胞凋亡特征更為明顯。酶活檢測(cè)結(jié)果表明日糧添加CLA使仔豬背部脂肪組織中的凋亡因子Caspase-3、-8和-9的活力均顯著升高(P＜0.05)。熒光定量PCR和western

5、blotti（n）g檢測(cè)結(jié)果表明CLA處理下調(diào)了抑凋亡因子Bcl2的mRNA和蛋白表達(dá)，升高了（足）凋亡因子Bax和P53的mRNA及蛋白表達(dá)，同時(shí)增加Cyt-C的mRNA表達(dá)并且促進(jìn)Cyt-C蛋白從線粒體釋放到細(xì)胞質(zhì)中。Caspase-3的mRNA表達(dá)上調(diào)和剪切型的CaSpaSe-3蛋白水平的增加說(shuō)明凋亡執(zhí)行因子CaSpaSe-3被激活并介導(dǎo)了脂肪細(xì)胞凋亡的發(fā)生。另一方面，CLA處理后還提高了脂肪細(xì)胞中TNF-α及其受體TNFR1的m