大豆異黃酮對嶺南黃羽肉雞生產(chǎn)性能、肉品質(zhì)的影響和抗氧化作用機制研究.pdf

1、本研究用大豆異黃酮SI處理離體培養(yǎng)嶺南黃羽肉雞骨骼肌細胞,研究大豆異黃酮SI對骨骼肌細胞的增殖和抗氧化作用的影響:研究金雀異黃酮(GEN)對骨骼肌細胞脂質(zhì)過氧化、抗氧化酶活性和基因表達的影響;用H2O2/FeSO4氧化嶺南黃羽肉雞骨骼肌細胞造成氧化模型,研究在氧化環(huán)境中GEN和大豆異黃酮SI的抗氧化作用、對細胞膜流動性的影響及其對抗氧化酶基因表達的影響;在42日齡嶺南黃羽肉公雞飼糧中添加不同濃度梯度的大豆異黃酮SI,研究大豆異黃酮SI對

2、嶺南黃羽肉公雞生長性能、胴體指標(biāo)、肉品質(zhì)特性、血漿、肝臟和胸肌中生化指標(biāo)的影響以及胸肌中抗氧化酶基因表達的影響;采用2(大豆異黃酮SI添加)×2(魚油氧化處理)因子隨機分組設(shè)計,在42日齡嶺南黃羽肉公雞新鮮魚油或氧化魚油飼糧中添加或不添加大豆異黃酮SI,研究在兩種魚油飼糧中添加大豆異黃酮SI對嶺南黃羽肉公雞生長性能、胴體指標(biāo)、肉品質(zhì)特性、血漿、肝臟和胸肌中生化指標(biāo)的影響以及胸肌中抗氧化酶基因表達的影響;旨在探討大豆異黃酮對嶺南黃羽肉雞的

3、影響及其抗氧化作用機理,為大豆異黃酮作為一種抗氧化飼料添加劑在肉雞生產(chǎn)中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　 試驗一:選用20日齡嶺南黃羽肉雞雞胚在無菌環(huán)境下分離腿部骨骼肌,經(jīng)過剪碎、膠原酶Ⅰ和胰蛋白酶消化,通過100目和200目篩過濾,濾液轉(zhuǎn)移到10ml離心管中1700rpm離心、清洗得到骨骼肌原代細胞,用計數(shù)板計數(shù),根據(jù)計數(shù)結(jié)果將細胞液稀釋至5.0×105/ml,然后接種至培養(yǎng)瓶中,用完全培養(yǎng)基在二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時,再經(jīng)0.2

4、5％胰蛋白酶消化傳代,采用差速貼壁法得到骨骼肌衛(wèi)星細胞,以5.0×105/ml濃度接種至96孔板和24孔板,試驗分5組,各組無血清培養(yǎng)液中分別添加0、12.5、25、50、75和100μmol/L的大豆異黃酮SI(所用大豆異黃酮為廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所研制產(chǎn)品,純度為98.5％以上),大豆異黃酮預(yù)先溶解于二甲基亞砜中,并保持各組中二甲基亞砜濃度一致,所有培養(yǎng)液中均添加80μmol/LH2O2/FeSO4進行氧化處理建立氧化模型,每組

5、6個重復(fù)(孔),研究了大豆異黃酮對肉雞骨骼肌衛(wèi)星細胞增殖和抗氧化作用的影響,試驗觀察了骨骼肌衛(wèi)星細胞經(jīng)大豆異黃酮處理后的形態(tài)變化和采用MTT法測定骨骼肌衛(wèi)星細胞的增殖情況,結(jié)果表明,在氧化環(huán)境中,大豆異黃酮可減少骨骼肌衛(wèi)星細胞死亡,而且添加大豆異黃酮均促進骨骼肌衛(wèi)星細胞的增殖(p＜0.01),各大豆異黃酮處理組骨骼肌衛(wèi)星細胞經(jīng)MTT染色和SDS處理后的吸光度分別較對照組提高45.90％(P＜0.01)、58.64％(P＜0.01)、60

6、.21％(P＜0.01)、46.42％(P＜0.01)和25.48％(P＜0.05)。添加25,50,75和100μmol/LSI使細胞培養(yǎng)上清液中T-SOD活性分別提高17.02％(P＜0.01),13.00％(P＜0.05),13.26％(P＜0.05)和11.89％(P＜0.05),添加25μmol/L SI提高GSHPx活性90.68％(p＜0.05),75和100μmol/L SI處理組CAT活性分別比對照組提高49.17％(

7、P＜0.01)和49.13％(P＜0.05),SI有提高細胞上清液中T-AOC的趨勢(P＞0.05),添加75和100μmol/L大豆異黃酮處理顯著降低細胞CK的分泌(P＜0.05)?？傊?大豆異黃酮SI能促進骨骼肌衛(wèi)星細胞在氧化環(huán)境中的增殖,提高骨骼肌衛(wèi)星細胞的抗氧化能力。
　　 試驗二:為研究大豆異黃酮主要成分金雀異黃酮(GEN)對離體培養(yǎng)的雞骨骼肌細胞脂質(zhì)過氧化、抗氧化酶活性和基因表達的影響,嶺南黃羽肉雞骨骼肌細胞接受不同

8、濃度的GEN處理48h后,測定細胞培養(yǎng)上清液中谷胱甘肽過氧化物酶、超氧化物歧化酶和CAT活性以及丙二醛含量,應(yīng)用TaqMan實時熒光定量PCR法測定GEN對骨骼肌細胞中谷胱甘肽過氧化物酶基岡表達的影響。結(jié)果表明,與空白對照組相比,添加GEN組骨骼肌細胞培養(yǎng)上清液中MDA含量顯著降低(p＜0.05),添加1μmol/L和161μmol/L GEN顯著提高了雞骨骼肌細胞培養(yǎng)上清液中SOD活性(p＜0.05),添加4μmol/L和16μmol

9、/L GEN顯著提高了GSHPx活性(p＜0.05),細胞培養(yǎng)液中添加GEN具有提高GSHPx mRNA拷貝數(shù)趨勢,但各組間無顯著差異(p＞0.05)。由此可見,添加金雀異黃酮能抑制雞骨骼肌細胞的脂質(zhì)過氧化,增強雞骨骼肌細胞的抗氧化能力。
　　 試驗三:嶺南黃羽肉雞骨骼肌細胞以5.0×105/ml濃度接種至6孔板和24孔板,試驗分10組,組1為正?？瞻讓φ战M,未添加H2O2/FeSO4和大豆異黃酮,組2為氧化細胞組,僅添加H2O

10、2/FeSO4但未添加大豆異黃酮,組3、4、5、6在均添加50μmol/LH2O2/FeSO4基礎(chǔ)上分別10、20、40、80μmol/L的GEN,組7、8、9、10在均添加50μmol/L H2O2/FeSO4基礎(chǔ)上分別10、20、40、80μmol/L的SI,GEN和SI預(yù)先溶解于二甲基亞砜中,并保持各組中二甲基亞砜濃度一致,每組6個重復(fù)(孔),研究了GEN和SI對嶺南黃羽肉雞骨骼肌細胞抗氧化狀況、細胞膜流動性和骨骼肌細胞中CAT和

11、GSHPx mRNA表達量的影響。結(jié)果表明,H2O2/FeSO4氧化組細胞培養(yǎng)上清液MDA含量略高于其它各組(p＜0.1),T-SOD活性最低,極顯著低于其它各組(p＜0.01),GSttPx活性也最低,極顯著低于添加20、40、80μmol/L GEN組和添加20、80μmol/L SI組(p＜0.01)。添加40、80μmol/L SI組骨骼肌細胞培養(yǎng)上清液CK活性極顯著低于除80μmol/L GEN組的其它各組(p＜0.01),添

12、加80μmol/L GEN組CK活性顯著低于空白對照組和H2O2/FeSO4氧化組(p＜0.05)。H2Oz/FeSO4氧化組LDH活性極顯著高于空白對照組、40μmol/L GEN組和添加SI的各組(p＜0.01)。嶺南黃羽肉雞骨骼肌細胞經(jīng)H2O2/FeSO4處理后,細胞膜熒光偏振值p和微粘度η極顯著增加(P＜0.01)。添加80μmol/L GEN或者SI組細胞膜p值極顯著低于H2O2/FeSO4氧化處理組(P＜0.01),但與正常

13、未氧化組細胞無顯著差異(p＞0.05)。與H2O2/FeSO4氧化處理組比較,添加各水平GEN或者SI均極顯著降低了細胞膜η值(P＜0.01),下降幅度以80μmol/L濃度組最大,分別為87.53％和89.51％。各異黃酮水平和種類之間無顯著差異(p＞0.05)。添加20μmol/L SI或者20μmol/L GEN組的GSHPx基因表達水平極顯著高于氧化細胞組(P＜0.01),提示大豆異黃酮SI和GEN具有促使離體培養(yǎng)雞骨骼肌細胞的

14、GSHPx基因表達的作用?？傮w上,GEN和SI能夠從分子水平調(diào)控抗氧化酶活性,提高骨骼肌細胞在氧化環(huán)境中的抗氧化能力,改善細胞膜流動性,抵抗氧化損傷,SI的抗氧化作用效果較GEN更強。
　　 試驗四:選用42日齡體重約1.03kg健康、發(fā)育良好的嶺南快大黃羽肉雞公雞,根據(jù)體重隨機分為5個處理,每處理均6個重復(fù)(欄),每重復(fù)50只雞,試驗采用玉米-大豆?jié)饪s蛋白型基礎(chǔ)飼糧,各處理飼糧中分別添加0、10、20、40、80mg/kg大豆

15、異黃酮SI,其他營養(yǎng)成分一致,試驗雞自由采食粉料、自由飲水,地面平養(yǎng)。試驗期21日。研究不同濃度SI對黃羽肉雞生產(chǎn)性能、肉品質(zhì)和機體抗氧化性能的影響。試驗結(jié)果表明:添加大豆異黃酮SI增強肉雞抗氧化能力,改善生長性能和新鮮肉與肉品貯藏過程中的肉品質(zhì),對延長雞肉的貨架期十分有利,綜合考慮生產(chǎn)性能、肉品質(zhì)和各項生化指標(biāo)得出,43-63日齡階段嶺南黃羽肉雞飼糧中添加20mg/kg大豆異黃酮SI較適宜。
　　 試驗五：選用42日齡健康、發(fā)

16、育良好的嶺南快大黃羽肉雞公雛作為試驗雞,研究了在氧化魚油和新鮮魚油飼糧中添加SI對嶺南黃肉公雞生產(chǎn)性能、胴體品質(zhì)、肉品質(zhì)和抗氧化作用機制的影響。試驗結(jié)果表明：魚油氧化處理對雞肉品質(zhì)和抗氧化狀況產(chǎn)生不利影響,在魚油飼糧中補充大豆異黃酮SI提高了肉雞抗氧化狀況和肌肉的抗氧化穩(wěn)定性,抵抗脂質(zhì)過氧化,保護肉雞胸肌肉免受氧化損失,補充大豆異黃酮SI能從分子水平促進胸肌中GSHPx mRNA的表達,間接發(fā)揮抗氧化效應(yīng)。
　　 以上5個試驗結(jié)