急性腦梗死患者外周血Treg細(xì)胞及其相珜炎性因子水平的觀察分析.pdf

1、腦組織缺血缺氧損傷是一個復(fù)雜的病理生理反應(yīng)過程。對其機(jī)制尚存在許多模糊地方。超敏C-反應(yīng)蛋白與動脈粥樣硬化發(fā)展關(guān)系密切。急性腦梗死過程中，IL-10、IL6、腫瘤壞死因子-a、TGF-β1、CRP等細(xì)胞炎性因子在腦缺血損傷后腦組織中陽性細(xì)胞表達(dá)增加，提示炎性細(xì)胞因子可能在缺血腦組織損傷后激活細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)，參與腦組織缺血后損傷修復(fù)反應(yīng)。越來越多證據(jù)表明免疫應(yīng)答與動脈粥樣硬化之間存在密切關(guān)系。免疫激活引發(fā)炎性反應(yīng)可能參與動脈粥樣硬化發(fā)展過程

2、?，F(xiàn)有研究表明損傷腦組織釋放抗原，引起機(jī)體的免疫炎性反應(yīng)，尤其以機(jī)體的細(xì)胞免疫反應(yīng)為主，細(xì)胞因子進(jìn)一步誘導(dǎo)產(chǎn)生粘附分子和趨化因子的表達(dá)，然后促使炎癥細(xì)胞遷移、滲透、聚集到損傷腦組織周圍，修復(fù)損傷腦組織或者進(jìn)一步炎癥反應(yīng)瀑布爆發(fā)，炎性反應(yīng)調(diào)節(jié)失控，加重腦組織的二次損傷。同時也有動物實(shí)驗(yàn)結(jié)扎大鼠大腦中動脈造成梗死模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)腦梗死大鼠機(jī)體免疫T細(xì)胞處于免疫抑制，當(dāng)阻斷交感神經(jīng)后，機(jī)體免疫抑制逆轉(zhuǎn)。揭示免疫炎性反應(yīng)可能參與了急性腦梗死發(fā)病后

3、的病理修復(fù)過程。目前越來越多的研究表明調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)，一種具有免疫負(fù)調(diào)節(jié)作用的成熟的T細(xì)胞亞群，它的上調(diào)可以改善動脈粥樣硬化，對它進(jìn)行早期檢測是否對急性缺血性腦卒中的治療提供新的靶點(diǎn)。臨床實(shí)際工作中發(fā)現(xiàn)，對于大面積急性腦梗死患者，臨床合并肺部感染及泌尿系感染幾率明顯增加。而在腔隙性腦梗死、小灶性腦梗死或者中等梗死灶的腦梗死患者尚未觀察到該現(xiàn)象。課題由此產(chǎn)生聯(lián)想，在腦梗死患者中機(jī)體的炎性反應(yīng)是否不同，免疫狀態(tài)是否存在差別，不同梗

4、死面積的腦梗死患炎性水平是否存在區(qū)別。
　　目的：
　　分析急性腦梗死患者發(fā)病后，不同梗死體積對腦梗死患者外周血Treg細(xì)胞群落數(shù)量及其血清炎性因子水平的影響。
　　方法：
　　1、研究分組:選擇2014年11月至2015年3月我院神經(jīng)內(nèi)科診斷急性腦梗死患者45例，取短暫性腦缺血發(fā)作(TIA)患者15例作為對照組，腦梗死診斷符合全國第四屆腦血管病學(xué)術(shù)會議修訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)，入組患者均經(jīng)過顱腦CT或MRI影像學(xué)診斷證實(shí)

5、。腦梗死組的梗死體積的根據(jù)Pullicino公式來計(jì)算，計(jì)算公式=MRI掃描陽性層數(shù)÷2。根據(jù)公式計(jì)算出梗死體積，分為大梗死灶組(＞10cm3)、中梗死灶組(5-10m3)和小梗死灶組(＜5cm3)三組。
　　2、檢測方法:梗死組和TIA組患者分別于發(fā)病后24h、72h及第6d后晨空腹抽取外周血樣3ml/例，分離出血清及單個核細(xì)胞，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、白介素10（IL-10）、TGF-β1水平

6、的變化;收集單個核細(xì)胞，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測發(fā)病后24h腦梗死患者外周血中CD4+、CD25+、Foxp3+及Treg細(xì)胞數(shù)的比例以及Treg細(xì)胞來源的IL-10以及TGF-β1陽性細(xì)胞的百分比。
　　3、統(tǒng)計(jì)分析:使用t檢驗(yàn)和直線相關(guān)分析對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。
　　結(jié)果：
　　1.血清炎性反應(yīng)指標(biāo):急性腦梗死發(fā)病后24h、發(fā)病后72h、發(fā)病后第6天，TIA對照組、小梗死灶組、中梗死灶組、大梗死灶組患者h(yuǎn)s-CRP的水平變化，

7、P＜0.01。發(fā)病后72小時，hs-CRP水平最高，小梗死灶組與TIA對照組之間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05），小梗死灶組與大梗死灶組、中梗死灶組之間以及大梗死灶組與中梗死灶組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2.流式細(xì)胞檢測結(jié)果:(1)發(fā)病后24小時收集各樣本組的外周血單個核細(xì)胞，檢測CD4+T細(xì)胞所占淋巴細(xì)胞群落的比例:TIA對照組vs小梗死灶組，兩組數(shù)據(jù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.52，）;小梗死灶組vs中梗死灶

8、組，兩組數(shù)據(jù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.3，);中梗死灶組vs大梗死灶組，兩組數(shù)據(jù)有顯著性差異（P＜0.05）。
　　(2)發(fā)病后24小時收集各樣本組的外周血單個核細(xì)胞，檢測CD4+CD25+FOXp3+的Treg細(xì)胞所占淋巴細(xì)胞總數(shù)的比例:TIA對照組vs小梗死灶組，兩組數(shù)據(jù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.85）;小梗死灶組vs中梗死灶組，兩組數(shù)據(jù)有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01);中梗死灶組vs大梗死灶組，兩組數(shù)據(jù)有顯著性差異（P＜0.001）

9、。
　　(3)發(fā)病后24小時收集各樣本組的外周血單個核細(xì)胞，檢測TGF-β1陽性細(xì)胞所占淋巴細(xì)胞總數(shù)的比例: TIA對照組vs小梗死灶組，兩組數(shù)據(jù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.9）;小梗死灶組vs中梗死灶組，兩組數(shù)據(jù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.3）;中梗死灶組vs大梗死灶組，兩組數(shù)據(jù)有顯著性差異（P＜0.05)。
　　(4)發(fā)病后24小時收集各樣本組的外周血單個核細(xì)胞，檢測IL-10陽性細(xì)胞所占淋巴細(xì)胞總數(shù)的比例:TIA對照組vs小梗死灶

10、組，兩組數(shù)據(jù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.56);小梗死灶組vs中梗死灶組，兩組數(shù)據(jù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P＜0.05);中梗死灶組vs大梗死灶組，兩組數(shù)據(jù)有顯著性差異（P＜0.05）。
　　3.ELISIA結(jié)果分析:
　　(1)發(fā)病后24小時收集各樣本組的外周血清，ELISIA方法檢測炎性因子TGF-β1水平:小梗死灶組vs TIA對照組數(shù)據(jù)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(***P=0.08)，中梗死灶組vs TIA對照組數(shù)據(jù)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（**P=0

11、.08），大梗死灶組vs TIA對照組，兩組數(shù)據(jù)有顯著性差異（P＜0.001)。
　　(2)發(fā)病后24小時收集各樣本組的外周血清，ELISIA方法檢測炎性因子IL-10水平:小梗死灶組vs TIA對照組數(shù)據(jù)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（***P=0.8），中梗死灶組vs TIA對照組數(shù)據(jù)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（**P=0.7），大梗死灶組vs TIA對照組，兩組數(shù)據(jù)有顯著性差異（P＜0.001）。
　　4.腦梗死患者發(fā)病后24小時外周血Tre

12、g細(xì)胞、TGF-β1陽性細(xì)胞、IL-10陽性細(xì)胞群落比例與72小時外周血清hs-CRP水平的相關(guān)性分析:
　　Treg細(xì)胞比例與72小時外周血血清hs-CRP水平呈明顯直線正相關(guān)(r=0.87，P＜0.05)，TGFβ1陽性細(xì)胞比例與72小時外周血血清hs-CRP水平呈明顯直線正相關(guān)（r=0.78，P＜0.05），IL-10陽性細(xì)胞比例與72小時外周血血清hs-CRP水平呈直線正相關(guān)（r=0.51，P＜0.05）。
　　結(jié)論

13、：
　　1.與TIA對照組相比，急性腦梗死發(fā)病后24h，中梗死灶組、大梗死灶組患者外周血清中hs-CRP水平上升，72小時達(dá)到高峰，隨時間推移，其水平逐漸下降;小梗死灶組hs-CRP水平變化不明顯。
　　2.與TIA對照組相比較，腦梗死發(fā)病24小時左右，大梗死灶患者外周血Treg細(xì)胞及其釋放炎性因子TGFβ1和IL-10的能力上升;中梗死灶患者外周血Treg細(xì)胞及其釋放炎性因子IL-10的能力上升，而釋放TGFβ1能力并沒有

14、明顯改變;小梗死灶組患者外周血Treg細(xì)胞及其所釋放的炎性因子TGFβ1和IL-10的能力沒有明顯改變。
　　3.與TIA對照組相比較，發(fā)病24小時左右，大梗死灶患者外周血清中TGFβ1和IL10的水平明顯上升;中梗死灶和小梗死灶患者外周血清TGFβ1和IL-10的水平?jīng)]有明顯改變。
　　4.急性缺血性腦血管病患者發(fā)病的急性期24小時左右Treg細(xì)胞、TGF-β31陽性細(xì)胞、IL-10陽性細(xì)胞群落比例與72小時外周血血清hs