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文檔簡介
1、馬氏珠母貝[Pinctadamartensii(Dunker)]，又稱合浦珠母貝，是培育海水珍珠的主要貝類，已成為廣東、廣西和海南等沿海部分地區(qū)的支柱產(chǎn)業(yè)。馬氏珠母貝養(yǎng)殖業(yè)一直受到多毛類寄生病--鑿貝才女蟲(Polydoraciliata)的危害，這種多毛類寄生病極大地影響了海水珍珠產(chǎn)量和質(zhì)量，嚴重地制約著我國珍珠養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。因此，本研究通過抗病基因的篩選，為防治多毛類寄生蟲病提供了一種新方法。 本文以感病和健康馬氏珠母貝
2、的mRNA為實驗材料，構(gòu)建了馬氏珠母貝感病SMARTcDNA血液文庫1097個克隆，健康SMARTcDNA血液文庫1254個克隆。將地高辛標記的總RNA為探針，篩選文庫的克隆，共得到416個陽性克隆。按照顯色光密度相差5倍的原則，在陽性克隆中共挑選差異克隆66個，其中感病的馬氏珠母貝血液文庫中呈陽性的克隆有33個，健康馬氏珠母貝血液文庫中呈陽性的克隆也有33個。 將挑選的66個差異克隆測序，得到58個測序結(jié)果，有8個測序失敗。將
3、測序獲得的序列在NCBI上進行在線序列分析(去除載體序列、BLASTx、BLASTn、ORF、查找與數(shù)據(jù)庫中其它物種已知序列的同源性、搜索開放閱讀框、推斷可能的氨基酸序列)，并用CLustalX1.8軟件進行序列比對。結(jié)果顯示它們分別與29個已知基因具有不同程度的相似性，并根據(jù)這29個的基因片段設計了26個基因特異性引物，做RT-PCR。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，賴氨酸羥化酶基因、Profilin基因、細胞色素氧化酶基因、金屬硫蛋白基因、檢驗點激酶基因
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