谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶在近江牡蠣耐受腹瀉性貝毒中的作用研究.pdf

1、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶（glutathione-S-transferases，GST）是生物轉(zhuǎn)化II相反應(yīng)的重要酶，主要負(fù)責(zé)催化外源物質(zhì)與還原性谷胱甘肽（GSH）形成親水性共軛物，再由 ABC轉(zhuǎn)運蛋白（ATP-bindingcassette transporter，ABC）泵出細(xì)胞外從而達(dá)到清除毒物和外源物質(zhì)的目的，并在氧化應(yīng)激過程中發(fā)揮重要作用。
　　為揭示GST在貝體腹瀉性貝毒（DSP）代謝解毒中的作用，本研究在實驗室條件下，以

2、利瑪原甲藻（Prorocentrum lima）為DSP毒素的來源，通過實時熒光定量PCR（qPCR）分析了染毒后近江牡蠣（Crassostrea ariakensi）鰓和消化腺組織中GST-α、GST-ζ、GST-ω、GST-π、GST-μ、GST-ρ、GST-θ和微粒體GST（microsomal GST）mRNA表達(dá)的變化，采用酶聯(lián)免疫法（ELISA）測定了五種GS T亞型蛋白水平的變化，并分析了貝類鰓和消化腺組織中總 GST活性

3、的變化。進(jìn)一步利用 GST特異性抑制劑依他尼酸（ethacrynic ac id），觀察了GST活性受到抑制時貝類鰓和消化腺組織中O A含量、P-gp和M RP外排活性的變化。
　　實驗結(jié)果顯示，在投喂2×105 cells/L利瑪原甲藻之后，鰓組織中GST-π、GS T-μ、GST-θ、GST-ζ和mGST mRNA表達(dá)水平顯著上升，消化腺組織中只有GST-α和GST-ζ表達(dá)受到誘導(dǎo)。與 mRN A表達(dá)變化相類似，GS T蛋白水

4、平的變化也存在差異，當(dāng)利瑪原甲藻密度為2×105 cell/L的情況下，鰓組織中GS T-θ和微粒體GST的蛋白含量顯著增加，當(dāng)利瑪原甲藻密度為20×105 cell/L時，GS T-π蛋白含量顯著增加。鰓組織中GS T活性顯著提高，但消化腺中GS T活性并無明顯變化。這些結(jié)果提示GS T可能參與DSP毒素的代謝解毒，不同GST亞型在耐受DSP毒素的過程中的作用可能不同。
　　加入GST特異性抑制劑依他尼酸后，與未添加依他尼酸的利