外源性三碘甲腺原氨酸對金定鴨出雛前后生長及肝臟中脫碘酶表達的影響.pdf

1、胚胎期骨骼肌的發(fā)生決定鴨產(chǎn)肉量，比較發(fā)現(xiàn)生長速度差異較大兩品種鴨胚胎期生長速度不同，且生長速度較快品種鴨蛋清內(nèi)三碘甲腺原氨酸(T3)含量顯著高于后者。假設(shè)蛋清內(nèi)T3含量與鴨生長速度呈正相關(guān)，增加蛋清內(nèi)T3含量會促進鴨生長。為驗證假說，設(shè)計蛋清內(nèi)注射T3試驗，監(jiān)測鴨出雛前后生長、血清中甲狀腺激素(thyroid hormones，THs)含量及THs穩(wěn)態(tài)的主要調(diào)控因子——肝臟中脫碘酶(deiodinases)的表達情況;設(shè)計外源性T3干擾

2、鴨胚原代肝細胞生長試驗，檢測細胞中脫碘酶的表達。探討外源性T3對鴨出雛前后生長及肝臟中脫碘酶表達的影響。
　　1.蛋清內(nèi)注射T3對鴨出雛前后生長及血清中THs含量的影響
　　金定鴨種蛋200枚，隨機分為兩組:對照組蛋清內(nèi)（Control group，Con）注射100μL不含T3的生理鹽水，試驗組蛋清內(nèi)（Treatment group，Tre）注射100μL含250 ng T3的生理鹽水，兩組種蛋在同一條件下同期孵化。監(jiān)測2

3、7胚齡和7日齡鴨體重和胸肌重的變化，并采集鴨的血液;放射性免疫分析法檢測血清中T3和T4的含量;分析鴨出雛前后體重、胸肌重與血清T3、T4含量之間的相關(guān)性。結(jié)果表明，試驗組鴨體重和胸肌重在27胚齡和7日齡均顯著高于對照組(P=0.035，0.044;0.027，0.037)，試驗組血清中T3和T4的含量在7日齡均顯著低于對照組(P=0.040，0.040);試驗組鴨體重與T3含量呈極顯著負線性相關(guān)(r=-0.821，P=0.000)。<

4、br>　　2.蛋清內(nèi)注射T3對鴨出雛前后肝臟中脫碘酶表達的影響
　　試驗設(shè)計與上一章相同，采集鴨27胚齡和7日齡時的肝臟。實時熒光定量PCR(RT-PCR)檢測肝臟中D1和D3的mRNA表達，ELISA法檢測肝臟中D1和D3的蛋白含量及酶活性。分析D1和D3的表達與血清T3、T4含量之間的相關(guān)性。結(jié)果表明，試驗組肝臟D3的mRNA表達以及D1、D3的蛋白含量和酶活性在7日齡均顯著低于對照組(P=0.049;0.017，0.042;

5、0.013，0.039)。試驗組血清中T4含量與D3的mRNA表達呈極顯著正線性相關(guān)(r=0.913，P=0.001)，T3含量與D1和D3蛋白含量及酶活性均呈顯著正線性相關(guān)(r=0.790，P=0.011;r=0.746, P=0.021;r=0.757，P=0.018;r=0.744,P=0.022)。
　　3.外源性T3對鴨胚原代肝細胞中脫碘酶表達的影響
　　分離并培養(yǎng)鴨15胚齡原代肝細胞，24 h后隨機分為三組即對照

6、組(Control group，Con)、低濃度T3干擾組(Low T3 group，LT3)和高濃度T3干擾組(High T3group，HT3)。Con組細胞液中導(dǎo)入2μL不含T3的生理鹽水;LT3和HT3組細胞液中分別導(dǎo)入終濃度為5 ng/mL和20 ng/mL的T3，均以2μL生理鹽水為載體。干擾36h后細胞換液并繼續(xù)培養(yǎng)12h。在干擾后0h和12h時收集細胞并用Cell Counting Kit(CCK-8)法檢測細胞活性，R

7、T-PCR檢測細胞中D1和D3的mRNA表達，ELISA檢測細胞D1和D3的蛋白含量及酶活性。結(jié)果顯示，LT3組細胞活性及D1的mRNA表達在干擾后的0h和12h均顯著高于對照組（P=0.026，0.006;0.000，0.000）。
　　全文結(jié)論:蛋清內(nèi)T3含量的差異與鴨的早期生長有一定的相關(guān)性，外源性T3(250 ng)促進了鴨出雛前后體重和胸肌重的增長，降低了鴨出雛后血清中T3和T4的含量;鴨出雛前后生長模式發(fā)生改變，伴隨著