促?；鞍准把a體C3與動脈粥樣硬化的相關(guān)性研究.pdf

1、背景:
　　動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是心腦血管疾病的重要病理基礎(chǔ)，它的形成是一個復(fù)雜的病理過程，涉及到多個病理反應(yīng)，其特征性的病理過程為脂質(zhì)代謝紊亂、血管內(nèi)皮細(xì)胞受損、炎性細(xì)胞浸潤、斑塊破裂和血栓形成。代謝綜合征(metabolic syndrome，MS)和冠心病(coronary heart disease，CHD)是臨床上的常見疾病，二者均存在著不同程度的動脈硬化的發(fā)生。促酰化蛋白(Acylati

2、on stimulating protein，ASP)是1989年Cianflone等從人血漿中分離出的一種小分子量的蛋白質(zhì)，是由脂肪細(xì)胞分泌的一種自分泌激素，由補體C3裂解而成，與補體C3a的一個生物學(xué)片段C3a desArg77為同一物質(zhì)，C5L2是ASP的唯一功能性受體，ASP與C5L2受體結(jié)合后，通過增加二?；视娃D(zhuǎn)酰酶(Diacylglycerol acytransferase，DGAT)的活性及促進(jìn)葡萄糖轉(zhuǎn)運體(glucos

3、etransporter，GLUT)從細(xì)胞內(nèi)向細(xì)胞膜轉(zhuǎn)移，而影響著甘油三酯的合成以及葡萄糖的代謝。促?；鞍状x途徑功能失調(diào)將引起一系列脂質(zhì)代謝紊亂，并認(rèn)為與糖尿病、肥胖癥及心血管疾病密切相關(guān)，在動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過程中起到了一定的作用。
　　因此，本課題一方面通過研究ASP及補體C3與代謝綜合征患者動脈硬化指標(biāo)(踝臂指數(shù)(ankle brachial index，ABI)、肱踝脈搏波傳導(dǎo)速度(brachial-ankle，b

4、aPWV)、頸動脈內(nèi)中膜厚度(carotid intra-mediathickness，CIMT))的相關(guān)性來探討其是否參與動脈硬化的發(fā)生、發(fā)展;另一方面通過研究ASP、C5L2基因單核苷酸多態(tài)性及血清ASP、C3水平與冠心病的相關(guān)性來探討其是否為冠心病的易感基因及是否參與到冠心病的發(fā)病過程中，為動脈粥樣硬化的早期發(fā)現(xiàn)及早期干預(yù)治療提供新的思路。
　　第一部分 促酰化蛋白及補體C3與代謝綜合征動脈硬化的相關(guān)性研究
　　目的：

5、
　　通過測定MS組和對照組血清ASP、C3的水平，分析ASP、C3與代謝綜合征患者動脈硬化指標(biāo)baPWV、ABI、CIMT的相關(guān)性，探討ASP、C3與動脈粥樣硬化的關(guān)系。
　　方法：
　　選擇符合代謝綜合征(MS)診斷標(biāo)準(zhǔn)的患者76例為MS組，選擇同期門診查體志愿者（無高血壓、糖尿病、腹型肥胖、血脂紊亂、及其他炎癥、免疫性疾?。?2例作為對照組，所有入選對象均進(jìn)行病史采集及體格檢查，測量收縮壓(SBP)、舒張壓(DB

6、P)、身高、體重、腰圍，計算體重指數(shù)(BMI)。用酶聯(lián)免疫吸附法測定血清ASP水平，通過免疫比濁法測定血清補體C3水平，空腹血糖(FBG)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平的測定均由檢驗科進(jìn)行。頸動脈內(nèi)中膜厚度(CIMT)的測定采用體表超聲檢測，肱踝脈搏波傳導(dǎo)速度(baPWV)、踝臂指數(shù)(ABI)的測定采用BP-203RPEⅢ歐姆龍動脈硬化檢測裝置檢測。統(tǒng)計學(xué)處理

7、應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件，計量資料以((x)±s)表示，兩組間計量資料的比較采用t檢驗;兩個變量間的相關(guān)性分析采用Pearson分析及偏回歸分析;多因素分析采用多因素logistic回歸分析。以P＜0.05作為統(tǒng)計學(xué)差異檢驗標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)果：
　　(1)MS組與對照組比較，年齡、性別組成無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)，MS組腰圍，BMI，SBP，DBP，TC，LDL-C，TG，F(xiàn)BG高于對照組，存在統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05

8、)。
　　(2)MS組與對照組比較，MS組baPWV、CIMT高于對照組，ABI低于對照組，存在統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。
　　(3)MS組與對照組比較，血清ASP、C3水平無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05);多因素回歸分析顯示ASP、C3與MS無明顯相關(guān)性(P＞0.05）。
　　(4)MS+AS組與MS-AS組比較，前者ASP、C3、SBP、FBG、LDL-C水平增高，HDL-C降低，存在統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）;

9、baPWV異常組與正常組比較，SBP、FBG水平增高，存在統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05);ABI異常組與正常組比較，F(xiàn)BG、LDL-C水平增高，有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）;但baPWV、ABI正常與異常組比較，ASP、C3水平無統(tǒng)計學(xué)差異(p＞0.05)。
　　(5)雙變量相關(guān)性分析顯示血清ASP、C3水平與腰圍，BMI，F(xiàn)BG，TG存在明確相關(guān)性(p＜0.05），而與baPWV，ABI無顯著相關(guān)性;在排除腰圍、BMI等代謝因素以后

10、偏回歸分析顯示血清ASP、C3水平與CIMT呈獨立相關(guān)（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　ASP、C3與MS患者動脈硬化指標(biāo)CIMT存在相關(guān)性，在動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中起到了一定的作用。
　　第二部分 促酰化蛋白、補體C3及受體C5L2與冠心病的相關(guān)性研究
　　目的：
　　(1)通過測定CHD組血清ASP、C3水平，探討ASP、C3與冠心病及冠脈嚴(yán)重程度的關(guān)系。
　　(2)通過檢測山東濟(jì)南地區(qū)、不同

11、種族CHD患者ASP301T＞C及受體C5L2698C＞T單核苷酸多態(tài)性，探討其與冠心病的關(guān)系。
　　方法：
　　選擇符合冠心病診斷標(biāo)準(zhǔn)的患者450例為冠心病組，其中漢族245例，回族205例，選擇同期查體志愿者500例為正常對照組，其中漢族250例，回族250例。所有研究對象均為山東濟(jì)南地區(qū)漢族、回族人群，無血緣關(guān)系?？崭寡?FBG)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固

12、醇(LDL-C)水平均由檢驗科測定。采用TIANGEN RelaxGene Blood DNA System提取樣本基因組DNA，采用TaqMan探針技術(shù)進(jìn)行基因分型。選擇其中行冠狀動脈造影確定冠狀動脈血管狹窄程度的冠心病患者62例，選擇對照組42例，對其進(jìn)行病史采集及體格檢查，用酶聯(lián)免疫吸附法測定血清ASP濃度，通過免疫比濁法測定補體C3濃度，同時通過western blot測定血清補體C3蛋白表達(dá)水平，通過定量RT-PCR測定血清補

13、體C3 mRNA的表達(dá)水平。
　　統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件，計量資料以((x)±s)表示，Hardy—Weinberg平衡檢驗群體代表性;連續(xù)變量間比較采用t檢驗或方差分析;兩個變量間的相關(guān)性分析采用Pearson分析;多因素分析采用多因素logistic回歸分析;兩組等位基因及基因型分布頻率比較采用x2檢驗;不同基因型間血脂、血糖比較采用協(xié)方差分析。以P＜0.05作為統(tǒng)計學(xué)差異檢驗標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)果：
　

14、　(1)CHD組與對照組比較，年齡、性別無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05);CHD組SBP，DBP，TC，LDL-C，TG，F(xiàn)BG水平高于對照組，存在統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。
　　(2)CHD組與對照組比較，血清ASP，C3濃度明顯增高，存在顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)。
　　(3)CHD組中冠狀動脈中、重度病變組血清ASP、C3濃度高于冠狀動脈無病變、輕度病變組，存在統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05);雙變量相關(guān)性分析顯示血清AS

15、P、C3水平與冠脈Gensini積分存在明確相關(guān)性（P＜0.05）。
　　(4)CHD組補體C3的蛋白表達(dá)及mRNA表達(dá)水平在冠狀動脈中、重度病變組高于無病變、輕度病變組，存在統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。
　　(5)多因素logistic回歸分析顯示血清ASP、C3與CHD存在相關(guān)性（P＜0.05）。
　　(6)Hardy—Weinberg平衡檢驗:ASP基因型分布在漢族組和回族組的x2值分別為0.875(P=0.38

16、)和0.087(P=0.75)，C5L2基因型分布在漢族組和回族組的x2值分別為0.863(P=0.37)和1.439(P=0.26)，符合Hardy-Weinberg平衡，具有群體代表性。
　　(7)山東濟(jì)南地區(qū)漢族人群中，C5L2基因的等位基因C、T及基因型CT的分布頻率在CHD組和對照組中存在統(tǒng)計學(xué)差異，CHD組CT基因型及等位基因T的分布頻率高于對照組。而在山東濟(jì)南地區(qū)回族人群中，CHD組ASP、C5L2基因的基因型及等位

17、基因的頻率分布均有差異，ASP CC基因型及等位基因C的頻率增高，C5L2基因型CT及T等位基因的頻率也高于對照組。
　　(8)山東濟(jì)南地區(qū)漢族、回族人群中，ASP基因CC基因型及C5L2基因的CT基因型組血糖升高，而各血脂結(jié)果未見異常。僅在回族人群中發(fā)現(xiàn)ASP CC基因型及C5L2 CT基因型組TG水平升高，而TC、HDL-C、LDL-C均無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)論：
　　ASP、C3與冠脈嚴(yán)重程度存在相關(guān)性，可能