印跡基因在人類種植前胚胎及卵巢上皮癌中的研究.pdf

1、第一軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文印跡基因在人類種植前胚胎及卵巢上皮癌中的研究姓名：沈文潔申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：邢福祺20060512中文摘要syndrome，AS)患兒3例，二者均為遺傳性印跡疾病，在普通患者中僅有50％～60％的BWS和5％～10％的AS患者存在甲基化異常，而沒有基因突變，在ART出生患兒中100％的AS和70％的BWS患者存在母源性等位基因甲基化異常，導(dǎo)致印跡丟失。動物實(shí)驗(yàn)表明配子和早期胚胎形成期是甲基化

2、印跡擦除、建立和維持的關(guān)鍵窗口期，而此期恰為ART體外干預(yù)階段。因此可以推測ICSI或ART過程中的某些環(huán)節(jié)可能干擾了卵母細(xì)胞或早期胚胎基因組的印跡形成和維持，從而引發(fā)有關(guān)ART技術(shù)與先天性印跡疾病之間是否存在因果關(guān)系的討論。由于印跡基因?yàn)閱蔚任换虮磉_(dá)，更易受外界理化因素的影響出現(xiàn)印跡異常。研究表明動物胚胎體外培養(yǎng)時，培養(yǎng)條件可以干擾數(shù)條印跡基因的印跡形成和維持；尤其是牛、羊等家禽的胚胎受精后暴露于體外環(huán)境下，會產(chǎn)生“大嬰綜合癥”，臨

3、床特征類似于人類的BWS。考慮到人類胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)的目的是用于組織移植治療，因而在移植前，有必要了解體外培養(yǎng)環(huán)境是否干擾了印跡基因在胚胎干細(xì)胞中的印跡狀態(tài)。為解決ART和胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)過程中的這些臨床問題，迫切需要明確遺傳性印跡疾病相關(guān)印跡基因是否開始表達(dá)于人類卵子和種植前胚胎，完善印跡基因在人類種植前胚胎中的表達(dá)圖譜。由于人類成熟卵子和種植前胚胎來源的局限性，而且標(biāo)本僅含單個細(xì)胞至數(shù)個細(xì)胞，mRNA含量極微，技術(shù)難度大，目前相關(guān)研究多

4、局限于動物實(shí)驗(yàn)。對鼠胚的研究提示各印跡基因在早期胚胎階段開始表達(dá)的時間不同。人類僅檢測了SNPRN、H19、IGF一2等數(shù)條印跡基因在種植前胚胎中的表達(dá)。關(guān)于BWS相關(guān)印跡基因P57“92、LITl、TSSC3，S—R綜合癥(Silver—RussellSyndrome，SRS)候選印跡基因GRBIO以及抑癌印跡基因ARHI、LOTl、PEG3是否在人類種植前胚胎中表達(dá)，國內(nèi)外尚無報(bào)道，我們應(yīng)用巢式RT—PCR技術(shù)首次檢測了這7條印跡基