雌黃納米粒的研制及其體外抗腫瘤作用和分子機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、[目的]：①研究雌黃納米粒的制備工藝及表征；②研究雌黃納米粒體外抗腫瘤(白血?。篕562細(xì)胞和肝癌SMMC-7721細(xì)胞)作用，并與傳統(tǒng)劑型的雌黃作用進(jìn)行比較；③探討雌黃納米?？鼓[瘤作用的分子機(jī)制。 [材料方法]：①采用化學(xué)法制備雌黃納米粒，用透射電鏡(TEM)、能譜儀(EDS)對(duì)雌黃納米粒進(jìn)行表征及特性檢測(cè)；②通過(guò)MTT法研究雌黃納米粒對(duì)K562細(xì)胞和SMMC-7721細(xì)胞的體外增殖抑制作用，光鏡和電鏡觀(guān)察雌黃納米粒處理后細(xì)胞

2、的形態(tài)學(xué)變化，并與傳統(tǒng)劑型的雌黃作用進(jìn)行比較，流式細(xì)胞儀(FCM)測(cè)定雌黃納米粒及傳統(tǒng)劑型雌黃誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡率；③采用端粒重復(fù)序列擴(kuò)增一聚丙烯酰胺凝膠電泳銀染法檢測(cè)雌黃納米粒對(duì)K562細(xì)胞端粒酶活性的影響，免疫細(xì)胞化學(xué)法、RT-PCR方法檢測(cè)雌黃納米粒處理K562細(xì)胞后bcl-2和bax基因表達(dá)的變化。 [結(jié)果]：①TEM觀(guān)察顯示，自行研制的雌黃納米粒呈近似圓形或橢圓形，電子密度較高，分散性較好，粒徑分別約為20nm、60nm、

3、80nm、140nm和400nm 5種，EDS證實(shí)其為As<,2>S<,3>，無(wú)其他成分；②體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，傳統(tǒng)劑型的雌黃和雌黃納米粒(60nm，80nm，140nm)對(duì) K562 細(xì)胞和SMMC-7721細(xì)胞均產(chǎn)生明顯的生長(zhǎng)抑制和凋亡誘導(dǎo)作用，在相同的雌黃濃度及培養(yǎng)條件下，雌黃納米粒顯示出比傳統(tǒng)劑型的雌黃有更強(qiáng)的細(xì)胞毒作用。MTT分析：雌黃納米粒能強(qiáng)烈抑制K562細(xì)胞和SMMC-7721細(xì)胞的生長(zhǎng)，雌黃納米粒組的細(xì)胞存活率明顯低于同

4、濃度傳統(tǒng)劑型的雌黃處理組(P<0.001)。FCM結(jié)果顯示，雌黃納米粒的誘導(dǎo)凋亡作用明顯強(qiáng)于傳統(tǒng)劑型的雌黃；③端粒酶檢測(cè)結(jié)果顯示，雌黃納米粒能明顯抑制K562細(xì)胞端粒酶的活性，與傳統(tǒng)劑型的雌黃相比，效果更顯著。免疫細(xì)胞化學(xué)和RT-PCR結(jié)果顯示，雌黃納米粒對(duì)K562細(xì)胞bcl-2基因的蛋白及mRNA表達(dá)有抑制作用，對(duì)bax基因的蛋白及mRNA表達(dá)有促進(jìn)作用，并呈劑量依耐性。 [結(jié)論]：①采用化學(xué)法首次成功制備了5種不同粒徑的雌