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1、目前基于RG(Reverse genetics,RG)技術(shù)的流感減毒活疫苗成為流感疫苗的發(fā)展方向。本研究實(shí)驗(yàn)采用八質(zhì)粒病毒拯救系統(tǒng),以冷適應(yīng)流感病毒株A/Amn Arbor/6/60(H2N2)的六個(gè)內(nèi)部基因片段為病毒骨架,與WHO發(fā)布的2006~2007年流感病毒流行株A/New Caldonia/20/99(H1N1)的HA和NA基因進(jìn)行重組拯救出了H1N1亞型流感病毒的冷適應(yīng)株,為流感病毒減毒活疫苗的研發(fā)開辟了新的思路。首先運(yùn)用R
2、T-PCR方法擴(kuò)增得到了2006~2007流感病毒流行株的兩個(gè)表面抗原HA、NA基因片段,經(jīng)測(cè)序鑒定符合流感病毒拯救要求,并成功構(gòu)建了A/New Caledonia/20/99(H1N1)8質(zhì)粒體系冷適應(yīng)拯救的雙向轉(zhuǎn)錄/表達(dá)質(zhì)粒pAD-PB2、pAD-PB1、pAD-PA、pAD-NP、pAD-M、pAD-NS和pAD-HA、pAD-NA。其次應(yīng)用八質(zhì)粒拯救體系,拯救得到了A/New Caldonia/20/99(H1N1)流感病毒的冷
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