小麥條銹病新抗源L693抗性基因的EST分子標記作圖與共線性片段分析.pdf

1、小麥條銹病是由條形柄銹菌（Puccinia striiformis f.sp.Tritic）引起的世界范圍內廣泛發(fā)生的小麥流行病害。中國是一個人口大國，小麥是最主要的口糧之一，小麥條銹病對我國小麥產量影響尤其大。我國小麥條銹病流行體系更為復雜，條銹菌有越冬區(qū)和越夏區(qū)，很難從空間和時間上阻斷，使得防控工作很難取得成效。諸多學者研究指出，選育抗病品種和發(fā)掘新的抗病資源是防治小麥條銹病最有效的途徑，不斷發(fā)現新的抗病基因以應對新突變的毒性小種。

2、歷次大的條銹病流行，迫切要求我們多樣化主栽品種，不能單一推廣某個系列小麥，只能不斷豐富抗性基因資源，抗條銹病研究是沒有止境的斗爭，任重而道遠。
　　前期的研究通過SSR分子標記，已經確認抗病新品系L693的抗條銹病基因YrL693(YrYU25)在小麥1B染色體上，并篩選到多對SSR標記，但標記不夠多，需要通過其他分子標記技術進一步加密。
　　本研究是以抗病親本L693與感病親本L661雜交得到的F2后代和F2∶3家系為作圖

3、群體。首先查找文獻中報道的小麥1B染色體上的EST分子標記，進行多態(tài)性篩選，更多的EST標記設計需要從GrainGene網站下載1B染色體上EST資源，設計EST-STS標記，用以多態(tài)性篩選。之后用連鎖EST引物對應的EST序列與短柄草、水稻、高粱基因組進行比較基因組學分析，確定YrL693基因所在范圍在短柄草、水稻、高粱上的共線性片段。具體實驗結果如下:
　　1.抗病親本L693和感病親本L661雜交得到的F1代抗病，F1代自交

4、得到的F2代出現抗感分離，卡方檢驗符合3R∶1S的分離比;F2∶3家系各行也出現抗感分離，經卡方檢驗符合1R∶2H∶1S的分離比，由此足以證明L693的抗條銹性是受一對顯性基因控制。這個L693的抗性基因暫時命名為YrL693。
　　2.前期工作已經通過SSR標記將YrL693定位在1B染色體上，本研究采用EST分子標記技術進一步加密遺傳圖譜。經過F2群體基因組DNA的PCR擴增和聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，共得到8對連鎖的EST-S

5、TS標記:CD77、WE173、WE201、BE443300、BE518403、BE444094、BE404005和BE405692，在構建的遺傳連鎖圖譜上的位置分別是:1.186 cM、0.118 cM、1.011 cM、0.758 cM、0.853 cM、0.937 cM、0.948 cM和1.282 cM。其中，BE443300和BE444094分析的基因型呈3∶1，其余6對分析的基因型呈1∶2∶1。
　　3.用篩選到的8對

6、EST-STS引物以及饒和斐報道的共分離EST引物LS36對應的EST序列，與短柄草、水稻、高粱進行比較基因組學分析，發(fā)現BE444094、BE518403、LS36對應在短柄草3號染色體上2.22Mb(Bradi3g2616-Bradi3g27877)、水稻10號染色體上3.49Mb(Os10g0396400-Os10g0456500)和高粱1號染色體上8.12Mb(Sbo1g020230-Sb01g023110)的序列呈共線性。這些