gpr128表達(dá)和定位研究及基因剔除打靶質(zhì)粒構(gòu)建.pdf

1、本文論述了G蛋白偶聯(lián)受體gpr128表達(dá)和定位研究及基因剔除打靶質(zhì)粒構(gòu)建。 G蛋白偶聯(lián)受體是最大的哺乳動(dòng)物蛋白超家族之一，其作用是將信號(hào)跨膜傳遞給G蛋白，作為信號(hào)傳遞者參與生理轉(zhuǎn)化過程并可作為藥物治療靶點(diǎn)。受體分成五大家族：Glumate, Rhodopsin,Adhesion,Frizzled/Taste 2和Secretin。小鼠gpr128 為Adhesion家族成員，位于16 qC1.1，長(zhǎng)71.664kb，包含16 個(gè)

2、外顯子，開放閱讀框?yàn)?358bp，蛋白產(chǎn)物有785個(gè)氨基酸，包括長(zhǎng)N末端, GPCR 蛋白水解位點(diǎn)(GPS)和七個(gè)跨膜區(qū)(7TM),與人類GPR128同源性達(dá)69.9％。 半定量 RT-PCR 檢測(cè)示gpr128 僅表達(dá)于腸道。通過對(duì)0,1,2,4,8周小鼠的研究證實(shí) gpr128表達(dá)不存在時(shí)相特異性。免疫組化實(shí)驗(yàn)表明gpr128 在小鼠腸粘膜上皮細(xì)胞表達(dá)。 將成功克隆的gpr128全長(zhǎng) cDNA與pAcGFP1-N2載

3、體相連并轉(zhuǎn)染3T3細(xì)胞,真核表達(dá)載體形成的gpr128-EGFP融合蛋白定位于細(xì)胞膜，通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了生物信息學(xué)分析結(jié)論。 由小鼠gpr128基因序列設(shè)計(jì)擴(kuò)增同源臂：短臂長(zhǎng)2.9kb,長(zhǎng)臂3.2kb。同源臂插入載體后方向與PGK-neo 相反，預(yù)期以PGK-neo取代第4和第5外顯子為主共3479bp。打靶質(zhì)粒的構(gòu)建為基因剔除小鼠模型的建立和基因功能的研究打下基礎(chǔ)。 總之，通過基因表達(dá)分析gpr128主要表達(dá)在腸粘膜上