Hippo-YAP1通路參與調(diào)控湖羊肌肉生長(zhǎng)、發(fā)育機(jī)理的研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)以湖羊?yàn)檠芯繉?duì)象。首先，利用q-PCR技術(shù)對(duì)湖羊Smads基因在出生后不同生長(zhǎng)階段、不同性別、不同骨骼?。ū匙铋L(zhǎng)肌、比目魚(yú)肌、腓腸肌、趾長(zhǎng)伸?。┑南鄬?duì)表達(dá)進(jìn)行了分析。其次，利用膠原酶和胰酶聯(lián)合消化法，成功從湖羊肌肉組織中分離出了骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞，并采用差速貼壁法對(duì)其進(jìn)行了純化，所得細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，純度較高，低血清誘導(dǎo)后可以分化成肌管。最后，利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法，在湖羊肌衛(wèi)星細(xì)胞中對(duì)YAP1進(jìn)行了過(guò)表達(dá)后相關(guān)研究。初步探討Hippo-Y

2、AP1通路參與調(diào)控湖羊肌肉生長(zhǎng)、發(fā)育的機(jī)理。本研究獲得了以下結(jié)果:
　　1.Smads基因在湖羊背最長(zhǎng)肌中的表達(dá)量均低于其他肌肉組織;Smad2、Smad3、Smad4基因均在二日齡的表達(dá)量最高，Smad7基因在六月齡時(shí)表達(dá)量最高;Smad2、Smad3、Smad4基因在二日齡公羊中的表達(dá)量高于母羊，六月齡則低于母羊;
　　2.在四種不同肌肉組織中，Smad2與Smad3，Smad3與Smad4均存在極顯著正相關(guān)(P＜0.0

3、1)，體現(xiàn)了其共同對(duì)TGF-β/smad信號(hào)通路的抑制作用。YAP1與MSTN間均存在極顯著正相關(guān)(P＜0.01)，進(jìn)一步說(shuō)明了YAP1可能通過(guò)參與調(diào)控TGF-β/smad通路活性而參與肌肉的增殖和分化過(guò)程;
　　3.成功從湖羊肌肉組織中分離出了肌衛(wèi)星細(xì)胞。并采用差速貼壁法對(duì)其進(jìn)行了純化。所得細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，純度較高，低血清誘導(dǎo)后可以分化成肌管。Q-PCR結(jié)果表明在湖羊肌衛(wèi)星細(xì)胞大量分化為肌管的過(guò)程中，YAP1與MyoG基因的表