免疫組化方法示蹤PRV感染肛門括約肌的神經(jīng)傳導(dǎo)研究.pdf

1、偽狂犬病病毒是畜牧生產(chǎn)上一個(gè)重要的病毒，嚴(yán)重危害著養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展，同時(shí)作為神經(jīng)示蹤研究中的一種新興的模式病毒，也被科學(xué)家們廣泛關(guān)注和研究。
　　本研究測(cè)定了實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的偽狂犬病毒株SA215-T的病毒滴度，并用該毒株感染SD大鼠，建立了SA215-T人工感染大鼠的病理模型。感染56小時(shí)后，大鼠出現(xiàn)發(fā)熱，奇癢和共濟(jì)失調(diào)等癥狀，115小時(shí)左右開始死亡，解剖病變主要為肺輕度水腫，腦組織彌漫性出血。PRV SA215-T感染大鼠后平均存

2、活時(shí)間120小時(shí)，比PRV Bartha-K61株感染大鼠的平均存活時(shí)間114小時(shí)稍長，PRV SA215-T適合用于建立PRV人工感染大鼠的病理模型。
　　本研究分別用PRV SA215-T與Bartha-K61人工感染大鼠，觀察記錄了大鼠感染偽狂犬病毒后的臨床癥狀及存活情況，在不同時(shí)間解剖大鼠并采集心肝脾肺腎腦等組織器官，通過PCR檢測(cè)PRV抗原在大鼠體內(nèi)各組織器官的分布規(guī)律。結(jié)果表明，大鼠感染PRV之后的48小時(shí)內(nèi)，各組織器

3、官內(nèi)未檢測(cè)到PRV抗原;感染56小時(shí)左右，肺臟PRV抗原呈陽性分布;隨著時(shí)間的推移，組織器官中PRV抗原分布越來越廣，最終幾乎遍布于所有組織器官。本研究建立了間接免疫組化檢測(cè)PRV抗原的方法并優(yōu)化了免疫組化條件。用建立的免疫組化方法可以便捷地檢測(cè)到大鼠組織器官中的PRV抗原。該方法快速簡單，敏感性高，特異性強(qiáng)，染色結(jié)果便于觀察，能用于臨床檢測(cè)。
　　本研究用建立的間接免疫組化方法檢測(cè)并定位了人工感染大鼠后PRVSA215-T在脊髓

4、中的位置，示蹤了PRV感染大鼠肛門括約肌的神經(jīng)傳導(dǎo)通路:感染后48小時(shí)在腰髓4-5節(jié)段初次檢測(cè)到PRV;感染56小時(shí)左右，胸髓11-12節(jié)段檢測(cè)到PRV;感染66小時(shí)左右在頸髓6-7節(jié)段檢測(cè)到PRV;感染72小時(shí)在大腦檢測(cè)到PRV?；蛉笔Ш蟮膫慰袢《揪哂心嫔窠?jīng)傳導(dǎo)特性，用免疫組化方法可以特異性地追蹤其在神經(jīng)傳導(dǎo)中的路徑。本研究通過建立的大鼠病理模型，探明了PRV感染大鼠肛門括約肌的神經(jīng)傳導(dǎo)通路，為進(jìn)一步研究先天性肛門閉鎖癥的發(fā)病機(jī)制