攜帶MART-1基因減毒產(chǎn)單核李斯特菌抑制小鼠惡性黑色素瘤的研究.pdf

1、目的：探討攜帶黑色素瘤分化抗原MART-1基因的減毒李斯特菌對(duì)惡性黑色素瘤的抑制作用及其機(jī)制的初步研究。
　　
　　 方法：構(gòu)建pERL3-MART-1載體，通過電轉(zhuǎn)化建立攜帶MART-1基因的△inlB LM-MART-1和△actA/△inlB LM-MART-1重組李斯特菌。濃度梯度稀釋法測定各減毒菌株半數(shù)致死量LD50。C57BL/6小鼠隨機(jī)分為PBS組,△inlB LM-MART-1組和△actA/△inlB

2、 LM-MART-1組。首次免疫后于第7d小鼠腹部皮下接種B16F10細(xì)胞，第14d、21d重復(fù)免疫小鼠，觀察并記錄腫瘤大小及小鼠生存狀態(tài)。應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR檢測腫瘤組織中MART-1表達(dá)量。流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠脾細(xì)胞中CD4+CD25+T細(xì)胞陽性率。
　　
　　 結(jié)果：經(jīng)鑒定成功構(gòu)建△inlB LM-MART-1和△actA/△inlB LM-MART-1。減毒株△inlB LM和△actA/△inlB LM的LD50

3、比LM-EGD標(biāo)準(zhǔn)株毒力分別下降2個(gè)和4個(gè)數(shù)量級(jí)。體內(nèi)抑瘤試驗(yàn)顯示△inlB LM-MART-1組和△actA/△inlB LM-MART-1組較PBS組腫瘤明顯減小。與PBS組比較，△inlB LM-MART-1組抑瘤率46.95％(F=6.3,P<0.05),△actA/△inlB LM-MART-1抑瘤率為83.96％(F=37.8,P<0.001),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。PBS組、△inlB LM-MART-1組和△actA/△i

4、nlB LM-MART-1組腫瘤組織中MART-1表達(dá)量遞增，以ＰＢＳ組表達(dá)量為１，后兩組為8.988±0.207和11.315±0.445，各組間均有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），且三組小鼠脾細(xì)胞中CD4+CD25+T細(xì)胞陽性率依次為2.52±0.20％，1.14±0.13％和0.44±0.15％（2.52±0.20％ vs 1.14±0.13％，F(xiàn)=271.7,P<0.001； 2.52±0.20％ vs 0.44±0.15％，F(xiàn)