大鼠脊肋區(qū)創(chuàng)傷后腎臟損傷的研究——外源性ADM干預(yù)及ADM、IL-4及IFN-γ的表達(dá).pdf

1、本文通過(guò)自由落體生物撞擊儀打擊大鼠脊肋區(qū)，建立創(chuàng)傷模型。對(duì)經(jīng)體表創(chuàng)傷后的大鼠應(yīng)用外源性腎上腺髓質(zhì)素(adrenomedullinRat1-50，ADM)進(jìn)行干預(yù)，觀察腎臟組織中γ-干擾素、白介素-4及內(nèi)源性腎上腺髓質(zhì)素表達(dá)的變化規(guī)律，研究外源性腎上腺髓質(zhì)素對(duì)腎臟機(jī)械性創(chuàng)傷的保護(hù)作用，探討創(chuàng)傷后機(jī)體免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)機(jī)制。 方法：大鼠輕度腹腔麻醉后，放置載鼠平臺(tái)上，利用自行研制的生物撞擊儀，從45cm高度以自由落體方式直接打擊大鼠脊肋

2、區(qū)制作腎臟創(chuàng)傷模型。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為四個(gè)大組，正常對(duì)照組D(8只)、創(chuàng)傷組C(C1、C2、C3、C4共32只，分別在打擊后1、6、12、24小時(shí)各處死8只)、創(chuàng)傷前給藥組A(A1、A2、A3、A4共32只，分別在打擊后1、6、12、24小時(shí)各處死8只)、創(chuàng)傷后給藥組B(B1、B2、B3、B4共32只，分別在打擊后1、6、12、24小時(shí)各處死8只)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用快速心臟采血法處死。迅速解剖動(dòng)物提取下丘腦、垂體、腎上腺和腎臟標(biāo)本，10％甲醛固定

3、。HE染色觀察創(chuàng)傷后組織的基本病理改變。免疫組化染色觀察γ-干擾素、白介素-4及腎上腺髓質(zhì)素在組織中的表達(dá)，通過(guò)比較，觀察陽(yáng)性表達(dá)指標(biāo)在各組之間的差異以及隨時(shí)間變化的規(guī)律性。 結(jié)果：腎臟創(chuàng)傷后同一時(shí)相內(nèi)，各組間腎臟組織ADM的表達(dá)強(qiáng)度具有由A區(qū)至D區(qū)逐漸減弱的區(qū)域性特點(diǎn)。各組內(nèi)比較又具有時(shí)序性特點(diǎn)，A組在創(chuàng)傷后1h出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)，6h陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度降低，12h陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度上升，24小時(shí)升高并達(dá)高峰；B組在腎臟創(chuàng)傷后1h為陽(yáng)性表達(dá)最強(qiáng)

4、，6h陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度降低，12h繼續(xù)降低，24小時(shí)陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度輕度上升；C組在腎臟創(chuàng)傷后1h為陽(yáng)性表達(dá)較強(qiáng)，6h陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度降低，12h繼續(xù)降低，24小時(shí)顯著增強(qiáng)并達(dá)高峰；D組呈陽(yáng)性表達(dá)。同一時(shí)段各組間ADM的表達(dá)：創(chuàng)傷后1h，B組ADM陽(yáng)性表達(dá)最強(qiáng)，A組次之，C組最弱。創(chuàng)傷后6h，A組與B組ADM陽(yáng)性表達(dá)最強(qiáng)，C組與D組陽(yáng)性表達(dá)弱；創(chuàng)傷后12h，A組ADM陽(yáng)性表達(dá)最強(qiáng)，C組最弱，B、D兩組居中；創(chuàng)傷后24h，A組ADM陽(yáng)性表達(dá)仍為最強(qiáng)。

5、整體各組間ADM的陽(yáng)性表達(dá)A組最強(qiáng)，B組次之，D組居中，C組最弱。 下丘腦ADM的陽(yáng)性表達(dá)多數(shù)位于神經(jīng)纖維中，少數(shù)神經(jīng)細(xì)胞核內(nèi)可見(jiàn)棕黃色顆粒。各組內(nèi)比較具有時(shí)序性特點(diǎn)：A組創(chuàng)傷后，1h為陽(yáng)性表達(dá)，6h陽(yáng)性表達(dá)增強(qiáng)，至12h陽(yáng)性表達(dá)降至低谷，24h明顯回升；B組創(chuàng)傷后，1h出現(xiàn)強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，在6h、12h、24h陽(yáng)性表達(dá)呈逐漸下降趨勢(shì)；C組創(chuàng)傷后1h出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)，6h降至谷底，12h回升，24h再次下降；D組呈陽(yáng)性表達(dá)。同一時(shí)段各組

6、間ADM的表達(dá)：創(chuàng)傷后1h，B組ADM陽(yáng)性表達(dá)最強(qiáng)，A組、C組次之，D組最弱；創(chuàng)傷后6h，A組ADM陽(yáng)性表達(dá)最強(qiáng)，B組次之，C組陽(yáng)性表達(dá)最弱；創(chuàng)傷后12h，C組ADM陽(yáng)性表達(dá)最強(qiáng)，A組最弱，B、D兩組居中；創(chuàng)傷后24h，A組ADM陽(yáng)性表達(dá)最強(qiáng)。整體各組間ADM的陽(yáng)性表達(dá)B組最強(qiáng)，A組次之，C組與D組最弱。 IL-4的陽(yáng)性表達(dá)：A組腎臟創(chuàng)傷后，1h出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)，6h、12h陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度逐漸上升，24小時(shí)升高并達(dá)高峰；B組創(chuàng)傷后，1

7、h為陽(yáng)性表達(dá)，6h陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度增高并達(dá)高峰，12h出現(xiàn)回落，24h繼續(xù)下降；C組腎臟創(chuàng)傷后，1h為陽(yáng)性表達(dá)，6h陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度略升高，12h降至谷底，24小時(shí)出現(xiàn)回升；D組呈陰性表達(dá)。同一時(shí)段各組間IL-4的表達(dá)：創(chuàng)傷后1h，B組IL-4陽(yáng)性表達(dá)最強(qiáng)，A組次之，C組較弱；創(chuàng)傷后6h，B組IL-4陽(yáng)性表達(dá)最強(qiáng)，A組次之，C組較弱；創(chuàng)傷后12h，A組IL-4陽(yáng)性表達(dá)最強(qiáng)，B組次之，C、D兩組為陰性表達(dá)；創(chuàng)傷后24h，A組IL-4陽(yáng)性表達(dá)仍為最

8、強(qiáng)，B組次之，C組較弱。整體各組間IL-4的陽(yáng)性表達(dá)A組與B組最強(qiáng)，C組次之，D組最弱為陰性表達(dá)。 IFN-γ的陽(yáng)性表達(dá)結(jié)果：A組腎臟創(chuàng)傷后，1h出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)，6h陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度略下降，12h陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度逐漸升高，24小時(shí)升高并達(dá)高峰；B組腎臟創(chuàng)傷后，1h為陽(yáng)性表達(dá)，6h陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度增高，12h出現(xiàn)回落，24小時(shí)升高并達(dá)高峰；C組腎臟創(chuàng)傷后，1h為陽(yáng)性表達(dá)，6h陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度降低，12h陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度升高并達(dá)高峰，24小時(shí)出現(xiàn)回落；D

9、組呈陽(yáng)性表達(dá)。同一時(shí)段各組間IFN-γ的表達(dá)：創(chuàng)傷后1h，B組IFN-γ陽(yáng)性表達(dá)最弱；創(chuàng)傷后6h，B組IFN-γ陽(yáng)性表達(dá)最弱；創(chuàng)傷后12h，C組IFN-γ陽(yáng)性表達(dá)最強(qiáng)，B組最弱，A、D兩組居中；創(chuàng)傷后24h，A組IFN-γ陽(yáng)性表達(dá)最強(qiáng)，C組次之，B、D兩組最弱。整體各組間IFN-γ的陽(yáng)性表達(dá)C組最強(qiáng)，A組次之，B組與D組最弱。 結(jié)論：腎組織ADM的表達(dá)強(qiáng)度與創(chuàng)傷后組織缺血缺氧的嚴(yán)重程度有密切關(guān)系；腎臟損傷給予外源性ADM干預(yù)，對(duì)

10、腎組織具有明顯的保護(hù)作用，其作用強(qiáng)弱與給藥時(shí)間有密切關(guān)系；外源性ADM在腎損傷的過(guò)程中，除對(duì)腎損傷起保護(hù)作用外，還可使下丘腦內(nèi)ADM表達(dá)增強(qiáng)，預(yù)防機(jī)體急性創(chuàng)傷后引起的缺血再灌注，對(duì)腦部亦發(fā)揮保護(hù)作用；腎臟ADM與下丘腦ADM的陽(yáng)性表達(dá)存在正相關(guān)關(guān)系，提示下丘腦ADM對(duì)腎臟ADM表達(dá)有一定的上調(diào)作用；腎臟創(chuàng)傷早期各個(gè)時(shí)相的IL-4與IFN-γ表達(dá)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)關(guān)系，提示IL-4與IFN-γ在腎損傷與修復(fù)中依然發(fā)揮拮抗作用；創(chuàng)傷前預(yù)防性給予外源