膈下逐瘀湯加減方抗肝癌作用的機(jī)理研究.pdf

1、研究背景：原發(fā)性肝癌是我國常見的惡性腫瘤，死亡率極高。研究表明原發(fā)性肝癌的發(fā)病與bax、bcl-2、P53蛋白等相關(guān)基因的表達(dá)密切相關(guān)。端粒酶對原發(fā)性肝癌的發(fā)生有促進(jìn)作用。膈下逐瘀湯是清代醫(yī)家王清任的《醫(yī)林改錯》中治療膈下積塊的一個古方。在長期的臨床實踐中應(yīng)用該方加減治療原發(fā)性肝癌，能夠提高肝癌患者的生存率，改善生活質(zhì)量。為了闡明該方藥治療肝癌的作用機(jī)理，本課題擬對膈下逐瘀湯加減方的抑瘤作用及其對人肝癌細(xì)胞相關(guān)基因bax、bcl-2、P

2、53基因表達(dá)的調(diào)控及端粒酶活性的影響進(jìn)行探討。 目的： (1)探討膈下逐瘀湯加減方對肝癌H22荷瘤小鼠的抑瘤作用。 (2)探討膈下逐瘀湯加減方對端粒酶活性的影響。 (3)探討膈下逐瘀湯加減方對人肝癌細(xì)胞相關(guān)癌基因表達(dá)的調(diào)控作用。 方法： 以肝癌H22荷瘤小鼠為模型，觀察膈下逐瘀湯加減方抗腫瘤的作用，并分別計算抑瘤率和觀察瘤體組織學(xué)形態(tài)及檢測甲胎蛋白(AFP)、γ-谷胺酰轉(zhuǎn)移酶(r-GT)值

3、。制備五組實驗血清：不含藥血清、陽性對照藥物復(fù)方斑蝥膠囊含藥血清、膈下逐瘀湯加減方低、中、高濃度含藥血清對(用MTT法及3H-TdR摻入法)SMMC-7721增殖、細(xì)胞周期、肝癌相關(guān)基因(bax、bcl-2、P53，)的表達(dá)及端粒酶活性的影響。 結(jié)果： 1、膈下逐瘀湯加減方及復(fù)方斑蝥膠囊對肝癌H22荷瘤小鼠有明顯抑制作用，與陰性對照組(生理鹽水組)比較，具有顯著性差異，P<0.01；對瘤體組織AFP及r-GT測定結(jié)果，與

4、陽性對照組比較，具有顯著性差異，P<0.01。 2、膈下逐瘀湯加減方對SMMC-7721細(xì)胞端粒酶活性的影響，與對照組比較，膈下逐瘀湯加減方低，中、高濃度血清組及復(fù)方斑蝥血清組A值均顯著下降(p<0.05或p<0.01)，表明膈下逐瘀湯加減方低、中、高濃度血清組及復(fù)方斑蝥膠囊血清組均可抑制SMMC-7721細(xì)胞端粒酶活性，其中膈下逐瘀湯加減方高濃度血清組對SMMC-7721細(xì)胞端粒酶活性的抑制具有非常顯著的作用(p<0.01)。

5、 3、膈下逐瘀湯加減方中濃度及高濃度血清組與復(fù)方斑蝥膠囊血清組對人肝癌細(xì)胞SMMC—7721增殖均具有顯著的抑制作用，P<0.05。膈下逐瘀湯加減方對SMMC—721細(xì)胞周期有明顯影響作用，細(xì)胞在G0—G1期的比例增高，S期的比例降低。膈下逐瘀湯加減方能調(diào)控癌基因及抑癌基因，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，均具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。 結(jié)論： 1、膈下逐瘀湯加減方對肝癌H22荷瘤有明顯的抑制作用。