TFPI-2在乳腺腫瘤不同時(shí)期的表達(dá)變化及下調(diào)機(jī)制研究.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文TFPI2在乳腺腫瘤不同時(shí)期的表達(dá)變化及下調(diào)機(jī)制研究姓名：郭泓珅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：馬端20070415中文摘要TFPI一2在乳腺腫瘤不同時(shí)期的表達(dá)變化及下調(diào)機(jī)制研究中文摘要組織因子途徑抑制物一2(tissuefactorpathwayinhibitor一2，TFPI一2)，又稱胎盤蛋白一5(placentalprotein5，PP一5)或基質(zhì)相關(guān)性絲氨酸蛋白酶抑制劑(matrix—

2、associatedserineproteaseinhibitor，MSPI)，是一種帶有Kunitz型結(jié)構(gòu)域的蛋白酶抑制劑，屬于絲氨酸蛋白酶抑制物超家族成員，可能通過(guò)影響細(xì)胞外基質(zhì)的重塑參與組織發(fā)生、胚胎發(fā)育分化、傷口愈合、腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移和動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂等生理病理過(guò)程。為研究TFPI一2在乳腺腫瘤不同時(shí)期表達(dá)的變化情況，我們與復(fù)旦大學(xué)中山醫(yī)院乳腺外科合作，收集了83例從2004年8月至2006年8月入院治療的乳腺腫瘤患者乳腺腫瘤

3、切除標(biāo)本，其中2l例為良性腫瘤，其余62例乳腺癌標(biāo)本根據(jù)pTNM分期分為四組。應(yīng)用免疫組織化學(xué)檢測(cè)腫瘤標(biāo)本中TFPI一2的相對(duì)量(免疫組化常數(shù))，發(fā)現(xiàn)隨著惡性程度的增高，TFPI一2的表達(dá)下降；單因素方差分析統(tǒng)計(jì)比較發(fā)現(xiàn)良性腫瘤中TFPI一2的表達(dá)水平明顯高于惡性腫瘤，而惡性程度最高的pTNMⅣ組，TFPI一2表達(dá)最弱，明顯低于其它組(pO05)；進(jìn)一步分析TFPI一2的表達(dá)量與乳腺癌pTNM分期關(guān)系，發(fā)現(xiàn)TFPI一2與乳腺癌pTNM分

4、期呈負(fù)相關(guān)，r舢。=一O41，pO01；即隨著乳腺癌惡性程度的增高，TFPI一2的表達(dá)量隨之顯著下降。用westernblot和Rea卜timePCR檢測(cè)不同侵襲能力乳腺癌細(xì)胞中TFPI一2的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)高侵襲乳腺癌細(xì)胞MDA—MB一435幾乎檢測(cè)不到TFPI一2的表達(dá)，而低侵襲乳腺癌細(xì)胞T47D和MCF一7細(xì)胞的TFPI一2表達(dá)水平明顯高于高侵襲乳腺癌細(xì)胞MDA—MB一435，但比正常人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)水平稍低；在已檢測(cè)

5、的各種細(xì)胞中，TFPI一2的mRNA水平與與蛋白水平相符。根據(jù)這些結(jié)果，我們選取高侵襲的乳腺癌細(xì)胞株MDA—MB一435和低侵襲的乳腺癌細(xì)胞株MCF一7為模型，進(jìn)行TFPI一2表達(dá)下調(diào)的機(jī)制研究。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染pcDNA3一TFPI一2和pcDNA3一mock至MDA一船一435細(xì)胞后，篩選TFPI一2穩(wěn)定高表達(dá)細(xì)胞pcDNA3一TFPI一2和對(duì)照細(xì)胞pcDNA3一mock。將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的兩株細(xì)胞接種于裸鼠皮下，發(fā)現(xiàn)TFPI一2在早期能抑